【摘要】：肌內(nèi)脂肪沉積(intramuscular fat,IMF)是影響肉品質(zhì)的關(guān)鍵因素,心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)基因與IMF含量的遺傳變異相關(guān),近年來研究發(fā)現(xiàn),微小RNA(miRNA)可以通過結(jié)合靶基因H-FABP,進(jìn)而對(duì)IMF的含量進(jìn)行調(diào)節(jié),影響了肉的品質(zhì)。遼育白牛是遼寧省培育的新品種,為了進(jìn)一步提高遼育白牛肉品質(zhì),本試驗(yàn)就H-FABP進(jìn)行了研究。本研究中分3個(gè)試驗(yàn)部分：試驗(yàn)一：以遼育白牛、夏洛萊牛、本地黃牛、利木贊牛、利復(fù)牛、延江牛6個(gè)品種牛作為研究對(duì)象；通過巢式PCR的方法對(duì)該6個(gè)品種牛的3'非編碼區(qū)(UTR)進(jìn)行擴(kuò)增,利用分子生物學(xué)技術(shù),克隆這6個(gè)品種牛3'UTR區(qū)的H-FABP基因進(jìn)行序列測定；成功的克隆出這6個(gè)品種牛H-FABP基因3'UTR區(qū),長度在230bp左右。試驗(yàn)二：以試驗(yàn)一的測序序列作為研究對(duì)象；(1)通過生物信息學(xué)分析軟件,對(duì)遼育白牛H-FABP基因序列與其他品種牛的基因序列進(jìn)行比對(duì)并尋找單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP).分析結(jié)果表明：H-FABP基因的3'UTR區(qū)存在SNP,在170bp位點(diǎn)處發(fā)生了A/G突變。(2)通過在線軟件Segal Lab of Computational Biology探尋遼育白牛H-FABP基因3'UTR潛在的miRNAs.篩選結(jié)果表明：突變前后遼育白牛H-FABP基因都能夠結(jié)合的miRNAs總數(shù)有400多個(gè),其中突變前結(jié)合而突變后不結(jié)合的miRNAs有:btn-miR-421、bta-miR-484、bta-miR-2355-5p、bta-miR-2413、 btn-miR-2461-3p;突變前不結(jié)合而突變后結(jié)合的miRNAs有：bta-miR-212、bta-miR-411a、 bta-miR-2370-3p、bta-miR-30f、bta-miR-3604、bta-miR-2468。試驗(yàn)三：以遼育白牛、本地黃牛和利木贊牛3個(gè)品種牛作為研究對(duì)象,根據(jù)生工miRNA第一鏈cDNA合成(加尾法)試劑盒提供的下游通用引物設(shè)計(jì)特定基因的上游引物并進(jìn)行熒光定量PCR,基因包括bta-miR-421、bta-miR-484、bta-miR-2355-5p、 bta-miR-2413、bta-miR-2461-3p、bta-miR-212、bta-miR-411a、bta-miR-2370-3p、bta-miR-30f、 bta-miR-3604.bta-miR-2468。試驗(yàn)表明：bta-miR-30f和bta-miR-2468處于波谷,在這三個(gè)品種牛中表達(dá)量最低,對(duì)H-FABP基因的抑制作用可能越低,因此H-FABP對(duì)肉牛肌內(nèi)脂肪沉積起到的調(diào)節(jié)作用應(yīng)該最為顯著,肉牛的肌內(nèi)脂肪沉積可能越高；bta-miR-212、 bta-miR-411a、bta-miR-484、bta-miR-2355-5p、bta-miR-2413、bta-miR-2461-3p處于波峰與波谷之間,對(duì)H-FABP基因起到一定的抑制,因此H-FABP對(duì)肉牛的肌內(nèi)脂肪沉積應(yīng)該具有一定的調(diào)節(jié)作用；bta-miR-2370-3p、bta-miR-3604和bta-miR-421處于波峰,在三個(gè)品種牛中表達(dá)量最高,對(duì)H-FABP基因的抑制作用可能越高,因此肉牛肌內(nèi)脂肪沉積應(yīng)該越低。結(jié)論：本研究表明：(1)遼育白牛H-FABP基因的3'UTR區(qū)的序列長為235bp：(2)遼育白牛H-FABP基因的3'UTR區(qū)發(fā)生了SNP突變,在170位點(diǎn)處A/G；篩選出能夠與H-FABP基因的3'UTR區(qū)結(jié)合的miRNAs有400多個(gè),在突變前后結(jié)合發(fā)生改變的有11個(gè)miRNAs;(3)通過熒光定量PCR后,bta-miR-2370-3p、bta-miR-3604和bta-miR-421在三個(gè)品種牛中表現(xiàn)最為活躍,對(duì)H-FABP基因起到負(fù)調(diào)節(jié)的作用越強(qiáng),因此肉牛肌內(nèi)脂肪沉積可能越低；反之,bta-miR-30f和bta-miR-2468表現(xiàn)較為沉默,因而對(duì)H-FABP基因起到負(fù)調(diào)節(jié)的作用越弱,因此肉牛肌內(nèi)脂肪沉積可能越多。
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S823

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本文編號(hào)：2538716