發(fā)布時間：2019-09-09 15:15

【摘要】：通過用4種方法對羊布魯菌的檢測,確立適用于基層應用的羊布魯菌快速檢測技術。http://www.mdxycn.com/采用濁度儀LAMP、金屬浴LAMP、熒光目視檢測試劑盒LAMP和普通PCR共4種方法對羊血液中的布魯菌進行檢測,比較其檢測結果。結果表明,共檢測162份羊血液,布魯菌檢出率分別為濁度儀LAMP為8.6%、金屬浴LAMP為8.6%、熒光目視檢測試劑盒為8.6%、普通PCR為6.2%。LAMP較普通PCR方法特異性強且靈敏度高;金屬浴LAMP方法操作簡便,無需特殊設備,更適用于基層應用。
【圖文】：

分別為布魯菌活疫苗（Ｍ５株）ＤＮＡ（陽性對照）、雙蒸水（陰性對照）及待檢樣品ＤＮＡ。２結果２．１布魯菌Ｏｍｐ２５基因的金屬�。蹋粒停袛U增結果經(jīng)６３℃５０ｍｉｎ，９０℃１０ｍｉｎ擴增后，陽性對照管１號和待檢樣品管３號出現(xiàn)白色渾濁，經(jīng)６０００ｒ／ｍｉｎ，５ｍｉｍ離心后沉淀明顯，結果說明布魯菌核酸在擴增過程中產(chǎn)生大量焦磷酸鎂白色渾濁，離心后白色沉淀明顯。而陰性對照管２號和待檢樣品管４號未發(fā)生變化說明沒有擴增出布魯菌核酸。具體結果見圖１。用該方法檢測羊血液１６２份，檢出布魯菌１４份，布魯菌檢出率為８．６％。Ａ．離心前；Ｂ離心后；１．陽性對照；２．陰性對照；３、４．待檢樣品Ａ．Ｂｅｆｏｒｅｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ；Ｂ．Ａｆｔｅｒｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ；１．Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；２．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；３，４．Ｓａｍｐｌｅｓ圖１布魯菌Ｏｍｐ２５基因的金屬�。蹋粒停袛U增結果Ｆｉｇ．１ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓＯｍｐ２５ｇｅｎｅｂｙＬＡＭＰｍｅｔａｌｂａｔｈ２．２布魯菌Ｏｍｐ２５基因的實時濁度儀ＬＡＭＰ擴增結果經(jīng)６３℃４５ｍｉｎ，８０℃１０ｍｉｎ在ＬＡＭＰ實時濁度儀擴增后，２號通道出現(xiàn)藍色柱狀圖且柱狀圖底部為紅色，說明２號陽性對照管擴增出布魯菌核酸。其他通道未出現(xiàn)藍色柱狀圖且柱狀圖底部為綠色，說明陰性對照管未擴增出布魯菌核酸（圖２）。待檢樣品管３號所對應的３號通道出現(xiàn)藍色柱狀圖且柱狀圖底部為紅色，說

；２．Ｂｒｕｃｅｌｌａ（Ｍ５）ＤＮＡ；３．Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ；４．Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａＤＮＡ；５．ＳａｌｍｏｎｅｌｌａＤＮＡ圖２布魯菌Ｏｍｐ２５基因的實時濁度儀ＬＡＭＰ擴增結果Ｆｉｇ．２ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌａＯｍｐ２５ｇｅｎｅｂｙｒｅａｌ－ｔｉｍｅＬＡＭＰ１．陽性對照；２．陰性對照；３、４．待檢樣品１．Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；２．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；３，４．Ｓａｍｐｌｅｓ圖３布魯菌Ｏｍｐ２５基因實時濁度儀ＬＡＭＰ擴增結果Ｆｉｇ．３ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌａＯｍｐ２５ｇｅｎｅｂｙｒｅａｌ－ｔｉｍｅＬＡＭＰＡ．可見光；Ｂ．紫外燈；１．陽性對照；２．陰性對照；３、４．待檢樣品Ａ．Ｖｉｓｉｂｌｅｌｉｇｈｔ；Ｂ．Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ；１．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；２．Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；３，４．Ｓａｍｐｌｅｓ圖４熒光目視檢測試劑盒檢測布魯菌Ｏｍｐ２５基因ＬＡＭＰ擴增結果Ｆｉｇ．４ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌａＯｍｐ２５ｇｅｎｅｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔ２．４布魯菌ＩＳ７１１基因的ＰＣＲ擴增結果分析電泳結果可得布魯菌病疫苗（Ｍ５株）陽性ＤＮＡ（２號泳道）及待檢樣品（４號泳道）在８００ｂｐ和１８０ｂｐ有條帶，，說明擴增出布魯菌核酸。陰性樣品（３號泳道）及待檢樣品（５號泳道）只在８００ｂｐ有條帶，說明未擴增出布魯菌
【作者單位】： 新疆農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院;伊犁出入境檢驗檢疫局;
【基金】：新疆農(nóng)業(yè)大學研究生產(chǎn)學研項目(xjaucxy-yjs-20151014) 國家級大學生創(chuàng)新項目(201610758015)
【分類號】：S858.26

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 趙娜;劉金霞;孫殿興;;環(huán)介導等溫擴增技術在臨床檢測中的優(yōu)勢與展望[J];中國病原生物學雜志;2016年04期

2 楊粵;付博宇;張?zhí)N哲;馬曉燕;張偉;;環(huán)介導等溫擴增檢測技術的應用與方法改進[J];食品安全質(zhì)量檢測學報;2016年04期

3 鄒鋒;董林;楊俊濤;李新娉;李兵;馬雪;;肺癌住院患者醫(yī)院感染的病原菌分布及耐藥分析[J];中國醫(yī)藥指南;2014年16期

【共引文獻】

相關期刊論文 前2條

1 吳麗麗;郭海飛;蔡嘯靜;鄭維鍔;張武;孫洪雨;;老年非小細胞肺癌放化療患者醫(yī)院感染病原菌耐藥性分析[J];中華醫(yī)院感染學雜志;2016年13期

2 都瑾;程相樹;張yN捷;;肺癌住院患者醫(yī)院感染病原菌類型及耐藥性分析[J];中國病原生物學雜志;2015年09期

【二級參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 陳恩發(fā);李其義;鄧寬平;盧揚;彭慧元;;反轉錄-環(huán)介導等溫擴增技術(LAMP)快速檢測馬鈴薯病毒[J];貴州農(nóng)業(yè)科學;2015年03期

2 胡興娟;沈飚;江玲麗;王蓮芳;滕躍;朱竹君;;海產(chǎn)品中霍亂弧菌實時濁度LAMP檢測方法的建立[J];河南農(nóng)業(yè)科學;2014年10期

3 王賢達;林雄杰;胡菡青;王宗華;范國成;;柑橘黃龍病可視化LAMP檢測技術的建立及應用[J];熱帶作物學報;2014年05期

4 李明娟;;觀察肺癌合劑配合化療對中晚期非小細胞肺癌患者的臨床療效[J];中國醫(yī)藥指南;2014年05期

5 魏宗賽;丁珠云;曹方余;;肺癌患者醫(yī)院感染目標性監(jiān)測及危險因素分析[J];實用醫(yī)技雜志;2013年07期

6 馬利;張琳;張秀美;胡北俠;劉宗爭;許傳田;顏世敢;楊少華;李建亮;崔言順;;基于熒光顯色的環(huán)介導等溫擴增技術(LAMP)檢測禽呼腸孤病毒[J];中國獸醫(yī)學報;2013年02期

7 馬旭輝;;肺癌住院患者醫(yī)院感染的臨床分析[J];實用癌癥雜志;2013年01期

8 李凡;趙林清;鄧潔;朱汝南;孫宇;劉立穎;李玉運;錢淵;;兒童急性呼吸道感染中腺病毒環(huán)介導等溫擴增技術檢測方法的建立[J];中華兒科雜志;2013年01期

9 初亞男;成思佳;梁超;周國華;;可視化等溫擴增法快速篩查并分型禽流感病毒[J];中華實用診斷與治療雜志;2011年07期

10 劉恩伊;鐘美佐;黃進;曾珊;盧景琛;;376例老年肺癌患者醫(yī)院感染的臨床探討[J];實用預防醫(yī)學;2010年06期

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 呂才福;;青海省海南州1958年-2008年布魯菌病監(jiān)測分析[J];動物醫(yī)學進展;2009年03期

2 劉健鵬;楊增岐;馬杰;王軍衛(wèi);王仲智;喬文軍;劉小東;;布魯菌病的綜合防控措施[J];動物醫(yī)學進展;2009年10期

3 劉曉賀;韓文瑜;;布魯菌病的研究進展[J];河北科技師范學院學報;2011年01期

4 趙桂芳;葛興農(nóng);李海斌;;布魯菌病的防治對策[J];動物醫(yī)學進展;2008年S1期

5 馬鵬革;周寒;張琰;黨建國;霍小霞;王磊;張艷梅;馮甜;馮候梅;劉瑞霞;曹綏進;劉竹玲;馬維明;張建國;;綏德縣1996年-2008年布魯菌病監(jiān)測分析[J];動物醫(yī)學進展;2009年03期

6 丁選國;張知俠;;牛布魯菌病概述[J];中國牛業(yè)科學;2012年01期

7 張豫;張輝;張艷;孟茹;王震;陳瑞花;張俊波;魯芝子;陳創(chuàng)夫;;布魯菌糖基轉移酶對細胞炎癥反應的影響[J];畜牧獸醫(yī)學報;2012年09期

8 張浩;;職業(yè)性布魯菌病的預防[J];畜牧與飼料科學;2012年10期

9 孫泉云;夏爐明;盧軍;;野生動物感染布魯菌的研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2013年04期

10 康京麗;范偉興;狄棟棟;張海燕;吳文學;趙德明;;我國家畜布魯菌病防控工作存在的問題及建議[J];中國獸醫(yī)雜志;2013年03期

相關會議論文 前6條

1 陳海君;付躍娟;范順富;汪建明;陳凌;郭玉香;徐葉進;盛棋躍;;浙江金華地區(qū)布魯菌病六例臨床特征及流行病學分析[A];2012年浙江省醫(yī)學會肝病、感染病學學術年會暨浙江省感染科醫(yī)師學術年會論文集[C];2012年

2 韓穎潔;劉月琴;張英杰;;羊布魯菌病的流行特點及防控措施[A];中國畜牧獸醫(yī)學會養(yǎng)羊學分會2014年全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學術研討會議論文集[C];2014年

3 陳海;李春輝;朱蘭蘭;楊小敏;黎海文;;感染性心內(nèi)膜炎患者血液中分離到羊種布魯菌[A];2009年海南省微生物學檢測及質(zhì)量保證研討會論文集[C];2009年

4 劉悅;;布魯菌病1例報告[A];2014全國中西醫(yī)結合皮膚性病學術年會論文匯編[C];2014年

5 王凌航;楊滌;郜桂菊;趙紅心;;艾滋病合并布魯菌病一例[A];中華醫(yī)學會第四次全國艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國熱帶病學術會議論文匯編[C];2009年

6 王艷;王新衛(wèi);陳陸;趙軍;楊霞;王川慶;劉紅英;常洪濤;姚慧霞;;穩(wěn)定分泌抗羊種布魯菌脂多糖單克隆抗體細胞株的篩選與應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物傳染病學分會第十二次人獸共患病學術研討會暨第六屆第十四次教學專業(yè)委員會論文集[C];2012年

相關重要報紙文章 前5條

1 方華;牛布魯菌病的防治[N];農(nóng)民日報;2005年

2 本報記者 魏平;接觸牲畜,當心布魯菌病[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2011年

3 本報記者 陳錚;北大醫(yī)院汪波——果斷診斷罕見疾病“布魯菌病”[N];中國醫(yī)藥報;2009年

4 包頭市第三醫(yī)院肝病二科主任醫(yī)師 宋敏利;莫把布魯菌病當成“類風關”[N];健康報;2010年

5 本報記者 王珍;內(nèi)蒙古代表建議：加強草原牧區(qū)人畜共患流行疾病防控[N];中國民族報;2011年

相關博士學位論文 前3條

1 佟春玉;甘露聚糖修飾布魯菌多肽靶向樹突細胞增強免疫機制研究[D];吉林大學;2015年

2 田明星;流產(chǎn)布魯菌毒力相關基因鑒定及LsrB蛋白功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2016年

3 張蕾;幾種布魯菌抗原的免疫學特性研究[D];第四軍醫(yī)大學;2011年

相關碩士學位論文 前10條

1 王曉曼;負載布魯菌WboA-S_2株對骨髓源性肥大細胞的活化作用的體外研究[D];河北大學;2015年

2 呂蓓;湖羊交易市場從業(yè)人員布魯菌病流行病學調(diào)查[D];浙江大學;2015年

3 雷蘭杰;布魯菌LPS對小鼠子宮內(nèi)膜蛻膜化的影響[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

4 李楊;布魯菌OMP16對RAW264.7細胞凋亡與免疫活性的影響及其免疫原性研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年

5 高建鵬;流產(chǎn)布魯菌pyk和ppdk基因缺失株的構建及其生物學特性分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2016年

6 李玲玲;急性及亞急性布魯菌病患者γδT等淋巴細胞的表達[D];天津醫(yī)科大學;2016年

7 牙侯勛;基于牛布魯菌外膜蛋白OMP19、OMP22和OMP28三種重組蛋白的ELISA檢測方法研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2016年

8 李慧;一起布魯菌病的調(diào)查分析及布魯菌病檢測方法的比較[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2012年

9 孫巖;布魯菌免疫磁珠富集試驗研究和內(nèi)蒙布魯菌病危險因素調(diào)查[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2014年

10 陳科睿;2010-2014年靖邊縣羔羊與種公羊布魯菌病檢測[D];西北農(nóng)林科技大學;2014年

本文編號：2533676