【摘要】：通過(guò)用4種方法對(duì)羊布魯菌的檢測(cè),確立適用于基層應(yīng)用的羊布魯菌快速檢測(cè)技術(shù)。http://www.mdxycn.com/采用濁度儀LAMP、金屬浴LAMP、熒光目視檢測(cè)試劑盒LAMP和普通PCR共4種方法對(duì)羊血液中的布魯菌進(jìn)行檢測(cè),比較其檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果表明,共檢測(cè)162份羊血液,布魯菌檢出率分別為濁度儀LAMP為8.6%、金屬浴LAMP為8.6%、熒光目視檢測(cè)試劑盒為8.6%、普通PCR為6.2%。LAMP較普通PCR方法特異性強(qiáng)且靈敏度高;金屬浴LAMP方法操作簡(jiǎn)便,無(wú)需特殊設(shè)備,更適用于基層應(yīng)用。
【圖文】：

分別為布魯菌活疫苗（Ｍ５株）ＤＮＡ（陽(yáng)性對(duì)照）、雙蒸水（陰性對(duì)照）及待檢樣品ＤＮＡ。２結(jié)果２．１布魯菌Ｏｍｐ２５基因的金屬�。蹋粒停袛U(kuò)增結(jié)果經(jīng)６３℃５０ｍｉｎ，９０℃１０ｍｉｎ擴(kuò)增后，陽(yáng)性對(duì)照管１號(hào)和待檢樣品管３號(hào)出現(xiàn)白色渾濁，經(jīng)６０００ｒ／ｍｉｎ，５ｍｉｍ離心后沉淀明顯，結(jié)果說(shuō)明布魯菌核酸在擴(kuò)增過(guò)程中產(chǎn)生大量焦磷酸鎂白色渾濁，離心后白色沉淀明顯。而陰性對(duì)照管２號(hào)和待檢樣品管４號(hào)未發(fā)生變化說(shuō)明沒有擴(kuò)增出布魯菌核酸。具體結(jié)果見圖１。用該方法檢測(cè)羊血液１６２份，檢出布魯菌１４份，布魯菌檢出率為８．６％。Ａ．離心前；Ｂ離心后；１．陽(yáng)性對(duì)照；２．陰性對(duì)照；３、４．待檢樣品Ａ．Ｂｅｆｏｒｅｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ；Ｂ．Ａｆｔｅｒｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ；１．Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；２．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；３，４．Ｓａｍｐｌｅｓ圖１布魯菌Ｏｍｐ２５基因的金屬�。蹋粒停袛U(kuò)增結(jié)果Ｆｉｇ．１ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓＯｍｐ２５ｇｅｎｅｂｙＬＡＭＰｍｅｔａｌｂａｔｈ２．２布魯菌Ｏｍｐ２５基因的實(shí)時(shí)濁度儀ＬＡＭＰ擴(kuò)增結(jié)果經(jīng)６３℃４５ｍｉｎ，８０℃１０ｍｉｎ在ＬＡＭＰ實(shí)時(shí)濁度儀擴(kuò)增后，２號(hào)通道出現(xiàn)藍(lán)色柱狀圖且柱狀圖底部為紅色，說(shuō)明２號(hào)陽(yáng)性對(duì)照管擴(kuò)增出布魯菌核酸。其他通道未出現(xiàn)藍(lán)色柱狀圖且柱狀圖底部為綠色，說(shuō)明陰性對(duì)照管未擴(kuò)增出布魯菌核酸（圖２）。待檢樣品管３號(hào)所對(duì)應(yīng)的３號(hào)通道出現(xiàn)藍(lán)色柱狀圖且柱狀圖底部為紅色，說(shuō)

；２．Ｂｒｕｃｅｌｌａ（Ｍ５）ＤＮＡ；３．Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ；４．Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａＤＮＡ；５．ＳａｌｍｏｎｅｌｌａＤＮＡ圖２布魯菌Ｏｍｐ２５基因的實(shí)時(shí)濁度儀ＬＡＭＰ擴(kuò)增結(jié)果Ｆｉｇ．２ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌａＯｍｐ２５ｇｅｎｅｂｙｒｅａｌ－ｔｉｍｅＬＡＭＰ１．陽(yáng)性對(duì)照；２．陰性對(duì)照；３、４．待檢樣品１．Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；２．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；３，４．Ｓａｍｐｌｅｓ圖３布魯菌Ｏｍｐ２５基因?qū)崟r(shí)濁度儀ＬＡＭＰ擴(kuò)增結(jié)果Ｆｉｇ．３ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌａＯｍｐ２５ｇｅｎｅｂｙｒｅａｌ－ｔｉｍｅＬＡＭＰＡ．可見光；Ｂ．紫外燈；１．陽(yáng)性對(duì)照；２．陰性對(duì)照；３、４．待檢樣品Ａ．Ｖｉｓｉｂｌｅｌｉｇｈｔ；Ｂ．Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ；１．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；２．Ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；３，４．Ｓａｍｐｌｅｓ圖４熒光目視檢測(cè)試劑盒檢測(cè)布魯菌Ｏｍｐ２５基因ＬＡＭＰ擴(kuò)增結(jié)果Ｆｉｇ．４ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｒｕｃｅｌｌａＯｍｐ２５ｇｅｎｅｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔ２．４布魯菌ＩＳ７１１基因的ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果分析電泳結(jié)果可得布魯菌病疫苗（Ｍ５株）陽(yáng)性ＤＮＡ（２號(hào)泳道）及待檢樣品（４號(hào)泳道）在８００ｂｐ和１８０ｂｐ有條帶，，說(shuō)明擴(kuò)增出布魯菌核酸。陰性樣品（３號(hào)泳道）及待檢樣品（５號(hào)泳道）只在８００ｂｐ有條帶，說(shuō)明未擴(kuò)增出布魯菌
【作者單位】： 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院;伊犁出入境檢驗(yàn)檢疫局;
【基金】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)研究生產(chǎn)學(xué)研項(xiàng)目(xjaucxy-yjs-20151014) 國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目(201610758015)
【分類號(hào)】：S858.26

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2533676