【摘要】：本試驗旨在研究綿羊瘤胃細菌、原蟲蛋白質(zhì)分解代謝相關(guān)酶活力及谷氨酸脫氫酶體系的米氏常數(shù)(Km)值,為解釋綿羊瘤胃細菌、原蟲蛋白質(zhì)分解代謝特征提供酶學依據(jù)。選用6只1歲左右安裝永久性瘤胃瘺管的中國美利奴(新疆型)綿羊[平均體重為(32.00±1.36)kg],飼喂精粗比為30∶70的飼糧,依次采集飼喂前(0 h)和飼喂后1.5、3.0、6.0、9.0、12.0 h 6個時間點的瘤胃液,重復采集3次。分離和制備細菌、原蟲破碎液,分別測定相關(guān)酶活力及谷氨酸脫氫酶體系的Km值。結(jié)果顯示:1)綿羊瘤胃細菌、原蟲破碎液中蛋白酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷氨酸脫氫酶的活力隨飼喂時間的延長均呈現(xiàn)先升高后降低的動態(tài)變化規(guī)律,總體在飼喂后1.5 h達到峰值;谷氨酸和氨含量也呈現(xiàn)相似的變化規(guī)律。原蟲破碎液中參與蛋白質(zhì)分解代謝的這4種酶的活力在各時間點均極顯著高于細菌(P0.01)。2)原蟲破碎液谷氨酸含量極顯著高于細菌(P0.01);原蟲破碎液氨含量在1.5、6.0、9.0和12.0 h顯著或極顯著高于細菌(P0.05或P0.01)。3)綿羊瘤胃細菌、原蟲谷氨酸脫氫酶對煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的Km值分別為2.60×10~(-7)、1.48×10~(-7)mol/L;細菌、原蟲谷氨酸脫氫酶對谷氨酸的Km值分別為8.41×10~(-6)、4.91×10~(-6)mol/L;細菌、原蟲谷氨酸脫氫酶對還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的Km值分別為3.80×10~(-8)、2.70×10~(-8)mol/L;細菌、原蟲谷氨酸脫氫酶對α-酮戊二酸的Km值分別為1.16×10~(-6)、2.07×10~(-6)mol/L;細菌、原蟲谷氨酸脫氫酶對氨的Km值分別為2.97×10~(-5)、1.40×10~(-5)mol/L。結(jié)果提示,總體上,綿羊瘤胃細菌、原蟲中蛋白酶、谷氨酸脫氫酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶的活力在飼喂后1.5 h達到峰值,之后逐漸降低;綿羊瘤胃原蟲中蛋白酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷氨酸脫氫酶的活力均極顯著高于細菌,原蟲中蛋白質(zhì)分解代謝更旺盛;瘤胃原蟲中不僅存在谷氨酸轉(zhuǎn)氨機制,還可能存在利用氨重新合成氨基酸的機制。
【圖文】：

0．13±3．06B70．91±3．25B63．81±2．00BGlutamate原蟲Protozoa159．02±1．85A171．11±2．87A147．99±5．42A128．83±2．10A116．97±7．50A95．73±3．91A氨細菌Bacteria5．46±0．105．88±0．06B5．53±0．284．94±0．20b4．57±0．22b4．37±0．15bNH+4原蟲Protozoa5．88±0．286．53±0．41A5．77±0．375．59±0．18a5．18±0．19a4．83±0．12a2．3綿羊瘤胃液細菌、原蟲谷氨酸脫氫酶的Km值比較按LinewaverBurk法作圖，得到的典型結(jié)果如圖1、圖2所示。圖解計算出的Km值和vmax結(jié)果見表4。從表可見，谷氨酸脫氫酶對NAD+:細菌Km值為2．60×10－7mol/L，vmax為2．17×10－4mol/(L·min);原蟲Km值為1．48×10－7mol/L，vmax為6．70×10－5mol/(L·min)，原蟲Km值較校谷氨酸脫氫酶對谷氨酸:細菌Km值為8．41×10－6mol/L，vmax為1．35×10－4mol/(L·min);原蟲Km值為4．91×10－6mol/L，vmax為1．79×10－4mol/(L·min)，，原蟲Km值較校谷氨酸脫氫酶對NADH:細菌Km值為3．80×10－8mol/L，vmax為1．89×10－4mol/(L·min);原蟲Km值為2．70×10－8mol/L，vmax為2．73×10－4mol/(L·min)，原蟲Km值較校谷氨酸脫氫酶對α－酮戊二酸:細菌Km值為1．16×10－6mol/L，vmax為4．00×10－4mol/(L·min);原蟲Km值為2．07×10－6mol/L，vmax為6．67×10－4mol/(L·min)，細菌Km值較校谷氨酸脫氫酶對氨:細菌Km值為2．97×10－5mol/L，vmax為3．57×10－4mol/(L·min);原蟲Km值為1．40×10

1期熊文秀等:綿羊瘤胃細菌、原蟲蛋白質(zhì)分解代謝相關(guān)酶活力及谷氨酸脫氫酶體系的米氏常數(shù)值圖2瘤胃原蟲破碎液谷氨酸脫氫酶體系對NAD的Km值Fig．2KmvalueofGDHtoNADinrumenprotozoacrushingliquid3討論3．1綿羊瘤胃細菌、原蟲破碎液蛋白質(zhì)分解代謝主要相關(guān)酶活力的動態(tài)變化本試驗測定了在飼糧精粗比為30∶70時，綿羊瘤胃細菌、原蟲破碎液在飼喂前、后各時間點蛋白質(zhì)分解主要相關(guān)酶活力的變化。從酶活力的動態(tài)變化來看，瘤胃細菌和原蟲蛋白酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及谷氨酸脫氫酶的活力變化均呈現(xiàn)先升高后降低的動態(tài)變化規(guī)律，總體上在飼喂后1．5h上升至最大值，之后緩慢降低。Chen等［14］的研究表明，綿羊瘤胃中的肽濃度隨飼喂后時間的延長呈現(xiàn)出先升高后緩慢降低的變化規(guī)律，且在1．5h達到最高。瘤胃蛋白質(zhì)的快速降解在采食后1．5h左右達到最活躍的階段，這可能導致小肽和氨基酸的迅速積累［8］。王夢芝［15］和翟衛(wèi)爽［16］的研究指出，綿羊瘤胃液氨態(tài)氮濃度在不同飼糧間均表現(xiàn)出有相似的變化趨勢，采食后1．5～3．0h較高，之后逐漸降低。氨態(tài)氮濃度的變化規(guī)律表明，在采食后1．5h，瘤胃中的脫氨反應(yīng)達到最活躍的階段。表4綿羊瘤胃液細菌、原蟲破碎液谷氨酸脫氫酶的Km值比較Table4KmvaluesofGDHtoNADinrumenbacteriaandprotozoacrushingliquid項目ItemsKm值Kmvalue/(mol/L)細菌Bacteria原蟲Protozoa最大反應(yīng)速度vmax/［mol/(L·min)］細菌Bacteria原蟲Protozoa谷氨酸Glutamate8．41×10－64．91×10－61．35×10－41．79×10－4煙酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD2．60×10－71．48×10－72．17×10－46．70×10－5ɑ－酮戊二酸ɑ-ketoglutaricacid
【作者單位】： 新疆農(nóng)業(yè)大學新疆肉乳用草食動物營養(yǎng)重點實驗室;
【基金】：國家自然基金“瘤胃細菌、原蟲內(nèi)與NAD(P)H相關(guān)的幾個主要代謝途徑及其生理生化功能的研究”(31272473)
【分類號】：S826

【相似文獻】

相關(guān)會議論文 前1條

1 毛友安;鐘科軍;魏萬之;魏新亮;盧紅兵;;4-(N-亞硝基甲氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮對谷氨酸脫氫酶活性影響的電化學分析研究[A];中國煙草學會2004年學術(shù)年會論文集[C];2004年

相關(guān)碩士學位論文 前1條

1 鄧玉;豬腦谷氨酸脫氫酶的分離純化及性質(zhì)和功能基團研究[D];西南大學;2012年

本文編號：2531835