【摘要】：鹿流行性出血熱(epizootic hemorrhagic disease,EHD)是由呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬鹿流行性出血熱病毒(EHDV)引起的一種蟲(chóng)媒病毒病。廣泛分布于熱帶和溫帶地區(qū)。本研究采用針對(duì)EHDV群特異性抗原VP7蛋白設(shè)計(jì)的競(jìng)爭(zhēng)ELISA (C-ELISA)抗體檢測(cè)試劑盒在廣西境內(nèi)開(kāi)展牛、羊反芻動(dòng)物EHDV血清學(xué)調(diào)查。通過(guò)對(duì)廣西8個(gè)縣區(qū)217份山羊血清,313份黃牛血清進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)廣西境內(nèi)家養(yǎng)反芻動(dòng)物普遍存在EHDV感染,總陽(yáng)性率達(dá)到36.2%(192/530),其中,黃牛的血清陽(yáng)性率高達(dá)55%(172/313),明顯高于山羊(9.2%；20/217)。廣西家養(yǎng)反芻動(dòng)物EHDV感染具有地域差異和海拔高度的差異,表現(xiàn)為桂南地區(qū)明顯高于桂北地區(qū)；平原地區(qū)丘陵地區(qū)山地地區(qū)。為了解廣西地區(qū)EHDV傳播媒介庫(kù)蠓的種類及優(yōu)勢(shì)群體,在血清學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上選擇低海拔、高濕度、適宜媒介昆蟲(chóng)繁殖、EHDV血清學(xué)陽(yáng)性率高且牛羊密集的廣西馬山縣設(shè)立牛羊蟲(chóng)媒病監(jiān)控點(diǎn),在蚊蟲(chóng)活躍的八月底連續(xù)三天捕獲媒介庫(kù)蠓進(jìn)行形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定。結(jié)果在所鑒定的326只庫(kù)蠓中,以邊緣庫(kù)蠓(33.1%)和尖喙庫(kù)蠓(27.3%)為優(yōu)勢(shì)庫(kù)蠓。通過(guò)在監(jiān)控點(diǎn)篩選EHDV抗體陰性的10頭牛和5只山羊作為哨兵動(dòng)物,分別混養(yǎng)在EHDV抗體陽(yáng)性的牛群及羊群中,采用白天放牧,夜間趕回欄舍的方式飼養(yǎng)。1-4月每月采血一次,5-12月每周采血一次,采用C-ELISA試劑盒監(jiān)測(cè)其抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)情況,取哨兵動(dòng)物EHDV抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)時(shí)間點(diǎn)及前、后兩周的肝素鈉抗凝血紅細(xì)胞,采用直接接種BHK-21細(xì)胞及先在C6/36細(xì)胞傳一代后再接BHK-21細(xì)胞兩種方法同時(shí)分離EHDV。以RT-PCR、病毒中和試驗(yàn)等對(duì)分離株進(jìn)行鑒定,結(jié)果在3頭哨兵�？贵w轉(zhuǎn)陽(yáng)時(shí)間前后共8份血樣中分離到3株病毒,TCID50分別為10-25/0.1mL,10-2.83/0.1mL,10-2.5/0.1 mL,經(jīng)血清型鑒定均為EHDV-5型。這是首次在廣西牛群中分離到EHDV,說(shuō)明廣西反芻動(dòng)物存在EHDV感染。
【圖文】：

２．１邋ＥＨＤＶ在北美逡逑加拿大除不列顛哥倫比亞省的奧肯那根山谷有散在發(fā)生外，并無(wú)大范圍爆發(fā)ｔ２年美國(guó)亞利桑那州黑尾鹿、}B羊及２００８年德克薩斯州的哨兵牛上發(fā)現(xiàn)ＥＨＤＶＤＶ－２（Ａ化ｅｒｔａ邋ｓｔｒａｉｎ）中和抗體Ｗ。２００８年美國(guó)德克薩斯州、堪薩斯州白尾鹿血清ｓ－９

段２的主要特征，，納入研究的１１個(gè)病毒只有＞４５．８％的核巧酸序列同源性。該節(jié)段在不同逡逑的血清型么間無(wú)特定的保守或變異區(qū)域ＶＰ２決定病毒血清型的特異性。逡逑ＥＨＤＶ節(jié)段２／ＶＰ２序列的系統(tǒng)發(fā)育分析表現(xiàn)為四個(gè)不同集群（Ａ－Ｄ）（圖１－５）。與核逡逑也蛋白不同，它們不反映東／西部病毒分組Ｐ７３，而是表現(xiàn)出病毒血清學(xué)相關(guān)特性。逡逑ＥＨＤＶ－２和７為Ａ組（圖＾５）。ＪＡＰ１９５９／０１邋（２型）和ＡＵＳ１９８１／０６邋（７型）之間序列同逡逑源性為７０．４％ＮＴ邋（６８．５％ＡＡ）。逡逑ＥＨＤＶ－６和８為Ｂ組。病毒ＡＵＳ１９８１／０７邋（６型）和ＡＵＳ１９８２／０６邋（８型）之間同源性為的．０逡逑％ＮＴ邋（７１．１％ＡＡ）。ＢＡＲ１９８３／０１迄今為止仍未分類，很可能ＢＡＲ１９８３／０１屬于血清型６。逡逑ＡＵＳ１Ｗ１／０７邋（６型）和ＢＡＲ１９８３／０１邋（未分類）之間同源性為７２．６％ＮＴ邋（７６．７％ＡＡ），逡逑ＡＵＳ１９８２／０６邋（８型）和ＢＡＲ１９８３／０１邋之間同源性為７０．５％ＮＴ邋（７２．３％ＡＡ）。因此很可能逡逑ＢＡＲ１９８３／０１屬于血清６型。逡逑ＥＨＤＶ－１邋和３為Ｃ組。包括病毒ＵＳＡ１Ｗ５／０１邋（１邋型）和ＮＩＧ１Ｗ７／０１邋（３型）（圖＾５）。逡逑兩種病毒節(jié)段２同源性非常高，在８８．７％ＮＴ邋（９３．０％ＡＡ）。這些毒株很可能實(shí)際上屬于同逡逑一血清型。逡逑ＥＨＤＶ－４和５為Ｄ組。包括病毒分離株ＮＩＧ１９６８／０１邋（４型）和ＡＵＳ１９７７／０１邋（５型）（圖逡逑１－５）。這兩種病毒節(jié)段２同源性為６５．５％ＮＴ邋（６３．２％ＡＡ）。表明血清型４和５在同一個(gè)組中逡逑同源性最低
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S855.3

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本文編號(hào)：2528305