發(fā)布時(shí)間：2019-08-13 10:44

【摘要】：鴨圓環(huán)病毒(Duck circovirus,Du CV)屬于圓環(huán)病毒科(Circoviridae)圓環(huán)病毒屬(Circovirus),基因組為單股共價(jià)閉合環(huán)狀DNA,整個(gè)基因組大小約為2kb。鴨圓環(huán)病毒主要侵害病鴨的胸腺、法氏囊等免疫器官。鴨感染Du CV后表現(xiàn)為生長發(fā)育障礙、生長停滯,在出殼幾周內(nèi)發(fā)病,生長停滯和羽毛形狀失常。近年來實(shí)驗(yàn)室建立了檢測鴨圓環(huán)病毒的PCR方法和ELISA方法,但至今沒有快速對鴨圓環(huán)病毒的分型檢測方法。本實(shí)驗(yàn)利用兩型鴨圓環(huán)病毒Cap蛋白基因序列的特異性對兩型鴨圓環(huán)病毒分型。本研究主要進(jìn)行了如下工作:1.檢測兩種基因型鴨圓環(huán)病毒雙重PCR方法的建立Du CV存在兩個(gè)基因型,兩型Du CV的Cap基因核酸序列同源性在78%左右,二者之間的Cap蛋白序列的同源性只有77.6%左右,抗原表位預(yù)測分析表明二者之間也存在較大差異。而根據(jù)Du CV基因組同源性分型結(jié)果和Cap蛋白序列的分型結(jié)果基本一致,因此,我們選擇Cap蛋白對Du CV進(jìn)行分型鑒定。通過對從Genbank上下載的56個(gè)Du CV序列進(jìn)行同源性分析,結(jié)合兩個(gè)基因型Du CV Cap基因比對結(jié)果,設(shè)計(jì)了四條特異性引物,并對PCR反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,建立了雙重PCR檢測方法。研究結(jié)果表明,該方法特異性強(qiáng),能夠?qū)尚虳u CV進(jìn)行分型檢測,且不受組織DNA和其他病原的影響;靈敏度高,最多能夠檢測到10個(gè)拷貝的鴨圓環(huán)病毒DNA,能夠用于Du CV的分型檢測和分子流行病學(xué)調(diào)查。2.利用雙重PCR方法對山東地區(qū)養(yǎng)鴨場進(jìn)行流行病學(xué)檢測我們在不同時(shí)間采集了濰坊地區(qū)的8個(gè)鴨群共120只(每個(gè)鴨群15只)齡病死弱雛,采集其肝臟、胸腺、脾臟、法氏囊、腎臟、心臟等器官進(jìn)行Du CV檢測。使用建立的雙重PCR檢測方法進(jìn)行分子流行病學(xué)檢測,檢測結(jié)果表明:3個(gè)鴨群(37.5%)檢出Du CV-1和Du CV-2的混合感染,3個(gè)鴨群(37.5%)檢出Du CV-2的單獨(dú)感染。15只雛鴨被檢出感染Du CV,其中3.33%(4/120)的雛鴨檢出Du CV-1和Du CV-2的混合感染,9.17%(11/120)的雛鴨只感染Du CV-1或Du CV-2。采集泰安地區(qū)8個(gè)鴨群共120只雛鴨(每個(gè)鴨群15只)以同樣的方法進(jìn)行流行病學(xué)檢測,沒有檢出Du CV感染。試驗(yàn)結(jié)果表明山東省老養(yǎng)殖區(qū)鴨群中存在較為嚴(yán)重的Du CV-1和Du CV-2混合感染的現(xiàn)象。3.對鴨圓環(huán)病毒是否垂直傳播的初步探究王鑫等于2012年對濰坊地區(qū)鴨場進(jìn)行Du CV檢測,發(fā)現(xiàn)鴨場Du CV-1陽性率為27.32%,Du CV-2陽性率為42.81%。我們對Du CV感染陽性的某種鴨場中進(jìn)行了跟蹤檢測,共收集了80枚未孵化的種蛋、30只孵化過程中出現(xiàn)的死胚和120只剛出殼的雛鴨作為檢測對象,用本研究建立的多重PCR檢測方法進(jìn)行分子流行病學(xué)檢測。種蛋中Du CV-2單獨(dú)感染陽性率為2.50%,兩型Du CV混合感染率為1.25%,沒有檢測到Du CV-1單獨(dú)感染;死胚中Du CV-1單獨(dú)感染率為3.33%,Du CV-2單獨(dú)感染率為6.67%,兩型Du CV混合感染率為3.33%;剛出殼雛鴨中Du CV-1單獨(dú)感染率為2.50%,Du CV-2單獨(dú)感染率為6.67%,兩型Du CV混合感染率為3.33%。試驗(yàn)結(jié)果表明,該鴨場種蛋存在Du CV的感染,這也為Du CV的垂直傳播提供了直接證據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.32

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本文編號(hào)：2526073