【摘要】：緊張性不動(dòng)(Tonic immobility,TI),是動(dòng)物面對(duì)外界強(qiáng)烈刺激時(shí)因恐懼而呈現(xiàn)出全身不動(dòng)的一種狀態(tài),根據(jù)TI持續(xù)時(shí)間可以分為短TI(STI)和長(zhǎng)TI(LTI)兩種反應(yīng)表型。下丘腦-垂體-腎上腺(Hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA)軸控制著反應(yīng)激素的合成與釋放,對(duì)TI持續(xù)時(shí)間有顯著影響。在正常和應(yīng)激狀態(tài)下,不同TI表型肉雞的生長(zhǎng)性能和福利狀況存在差異,STI表型肉雞要優(yōu)于LTI表型肉雞。我們以往的研究表明,長(zhǎng)期低劑量皮質(zhì)酮(Corticosterone,CORT)處理可抑制肉雞胸肌的生長(zhǎng)發(fā)育。慢性皮質(zhì)酮處理主要通過(guò)增加機(jī)體氧化應(yīng)激損傷,而TI影響肌肉生長(zhǎng)可能與糖代謝水平不同有關(guān)。肌肉蛋白質(zhì)代謝水平是決定肌肉生長(zhǎng)的重要環(huán)節(jié),本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上,從骨骼肌蛋白質(zhì)代謝和能量代謝角度,進(jìn)一步研究慢性應(yīng)激和TI影響骨骼肌生長(zhǎng)的機(jī)制。此外,探索了慢性CORT應(yīng)激對(duì)肉雞膽固醇代謝的影響及機(jī)理,為研究肉雞福利和肌肉品質(zhì)提供參考資料。1 慢性CORT處理對(duì)不同TI表型肉雞胸肌蛋白質(zhì)代謝的影響根據(jù)TI的持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)短不同,將肉雞分成STI和LTI組。從27日齡開始,在飲水中添加CORT(5mg/L)并連續(xù)處理15 d,以模擬慢性應(yīng)激時(shí)體內(nèi)的CORT水平,于42日齡時(shí)結(jié)束實(shí)驗(yàn)。前期研究資料表明,CORT和LTI表型顯著降低肉雞體重和胸肌/體重比。為了研究LTI型和慢性CORT處理抑制胸肌生長(zhǎng)的機(jī)制,我們檢測(cè)了蛋白質(zhì)合成通路以及蛋白質(zhì)降解關(guān)鍵基因mRNA水平。結(jié)果顯示,TI和CORT對(duì)蛋白質(zhì)合成通路Akt/mTOR/p70s6k以及蛋白質(zhì)降解的關(guān)鍵基因Atrogin-1和MuRF1均沒(méi)有顯著影響(p0.05)。但Western blot結(jié)果顯示,LTI肉雞胸肌中Akt(p=0.05)和p-Akt(p=0.06)比STI肉雞高;與對(duì)照組相比,慢性CORT處理組肉雞胸肌中總Akt(p=0.09)和p70s6k(p=0.08)蛋白有降低的趨勢(shì)。提示LTI和CORT影響肉雞骨骼肌的生長(zhǎng)可能不是主要通過(guò)依賴mTOR的信號(hào)通路,但對(duì)蛋白質(zhì)降解途徑的影響仍需進(jìn)一步研究。2 慢性CORT處理對(duì)不同TI表型肉雞胸肌能量代謝的影響對(duì)于鳥類的胸肌,糖酵解途徑可以提供能量供肌肉收縮和生長(zhǎng)發(fā)育。我們以往研究顯示LTI表型和皮質(zhì)酮處理導(dǎo)致肌肉糖酵解效率降低,從而抑制了肌肉的生長(zhǎng)和發(fā)育。因此我們猜想LTI和CORT引起了肉雞骨骼肌能量?jī)?chǔ)存和代謝的改變。通過(guò)檢測(cè)胸肌和肝臟糖元含量,用高壓液相的方法檢測(cè)胸肌中ATP的含量以研究慢性CORT處理對(duì)不同TI表型肉雞肌肉能量?jī)?chǔ)存狀態(tài)的影響。結(jié)果顯示,STI肉雞胸肌ATP含量(p0.05),能荷(Energy charge,EC)(p0.01)和肌糖元含量(p0.05)顯著高于LTI表型。但是LTI肉雞胸肌的ADP含量(p=0.08)有高于STI表型肉雞的趨勢(shì)。慢性CORT處理顯著降低肝糖原的含量(p0.05),但是顯著升高胸肌中的EC(p0.05)。Real-time PCR 測(cè)定結(jié)果表明 STI 肉雞胸肌中 PPARα(p = 0.06)和AMPKα(p = 0.09)mRNA的表達(dá)有高于LTI表型的趨勢(shì)。慢性CORT處理顯著降低了胸肌糖酵解基因α-enolase(p0.05)的表達(dá)。提示:LTI表型和慢性CORT處理對(duì)胸肌能量?jī)?chǔ)存產(chǎn)生顯著影響。線粒體的氧化磷酸化對(duì)能量穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。對(duì)線粒體能量代謝相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示,STI表型肉雞胸肌的mtDNA拷貝數(shù)和細(xì)胞色素c氧化酶活力均高于LTI(p0.05)。用Real-time PCR方法檢測(cè)了mtDNA編碼的氧化磷酸化基因的表達(dá),發(fā)現(xiàn)COX1、COX2、NADH脫氫亞基1、3和6在STI表型肉雞的胸肌中表達(dá)高于LTI型(p0.05)。但線粒體調(diào)控區(qū)啟動(dòng)子的甲基化活性在TI和CORT組并沒(méi)有顯著改變(p0.05)。PGC-1α蛋白對(duì)線粒體的生物合成起主要調(diào)控作用,在STI表型肉雞中表達(dá)高于LTI表型(p0.05)。但是,TI和CORT不影響位于線粒體內(nèi)膜參與質(zhì)子傳遞的avUCP蛋白表達(dá)(p0.05)。以上結(jié)果提示STI肉雞胸肌的線粒體功能比LTI強(qiáng)。而慢性CORT處理不改變線粒體代謝,提示線粒體對(duì)低劑量外源性CORT處理敏感性較弱。3慢性CORT處理肉雞胸肌、肝臟膽固醇代謝的影響哺乳動(dòng)物長(zhǎng)期處于內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素(Glucocorticoid,GC)濃度過(guò)高的狀態(tài)容易引起代謝紊亂癥和脂質(zhì)代謝紊亂,表現(xiàn)為血液中甘油三酯的增加和總膽固醇水平的升高。然而,慢性CORT處理對(duì)肉雞膽固醇代謝的影響尚未見報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn),慢性CORT處理極顯著增加了胸肌(p0.001)、腿肌(p0.01)和肝臟(p0.05)中總膽固醇的水平,同時(shí)慢性CORT處理增加了胸肌(p0.001)、肝臟(p=0.06)中總甘油三酯的含量。CORT處理顯著上調(diào)胸肌組織中HMGCR(p0.05)的mRNA表達(dá),11P-HSD1轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)有下調(diào)的趨勢(shì)(p=0.08),但是不影響GR,11β-HSD2,CYP7A1,CYP27A1,ApoB 和 LDLR 轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)(p0.05)。此外,慢性 CORT處理對(duì)肝臟組織CYP7A1(p=0.07)和ABCA1(p=0.06)在mRNA水平有下調(diào)的趨勢(shì)。Western blot結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,CORT處理顯著增加核蛋白GR、HMGCR和 LDLR(p0.05)的蛋白含量,對(duì)肌細(xì)胞全蛋白GR(p=0.08)、ApoA1(p=0.06)、11β-HSD2(p=0.07)有增加趨勢(shì)。此外,慢性CORT處理顯著增加肝臟組織GR、11β-HSD2、LDLR(p0.05)的蛋白水平,但是對(duì)HMGCR(p=0.06)的蛋白含量有下調(diào)趨勢(shì)。以上結(jié)果表明,慢性CORT處理引起肉雞胸肌組織膽固醇的沉積,其機(jī)制可能與肌細(xì)胞內(nèi)合成膽固醇增加和攝取增加有關(guān)。而CORT誘導(dǎo)肉雞肝臟膽固醇增加可能與轉(zhuǎn)運(yùn)增加、輸出減少有關(guān)。
【圖文】：

線粒體后可Ｗ直接激活線粒體基因組，引起線粒體編碼基因的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制。同時(shí)，核逡逑編碼的蛋白通過(guò)膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制從細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)到線粒體，與線粒體基因編碼的呼吸鏈亞基逡逑一起完成組裝。分裂與融合的適當(dāng)進(jìn)行構(gòu)成了線粒體工作網(wǎng)的有機(jī)運(yùn)行。（圖１－３）逡逑每個(gè)線粒體都有多份基因組的拷貝數(shù)，，線粒體ＤＮＡ的數(shù)量Ｗ及線粒體ＤＮＡ編碼基逡逑因的拷貝數(shù)都能決定著線粒體編碼基因的轉(zhuǎn)錄Ｗ及蛋白的翻譯。線粒體作為產(chǎn)能的重逡逑要細(xì)胞器，每個(gè)細(xì)胞中存在著多個(gè)線粒體，不同種類的細(xì)胞所含線粒體數(shù)量也存在很逡逑大的差別。對(duì)于禽類線粒體拷貝數(shù)的研究較少，有報(bào)道漠化乙錠對(duì)雞胚胎成纖維細(xì)胞逡逑的ｍｔＤＮＡ拷貝數(shù)的影響Ｗ及Ｔｆａｍ對(duì)雞的淋己細(xì)胞ＤＴ４０線粒體拷貝數(shù)的影響［７６］。逡逑Ｉ邋Ｎｕｃｌｅｕｓ邋Ｉ邐ＡＡｉｔｏｃｈ加ｄｒｉｏｔ逡逑＾邐Ｋｒｅｂｓ巧幻８邋ｅｎｚｙｍｅｓｔ邐ｔ逡逑Ｖ邋：邋．邋Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ邐Ｕ貧�。。鬟姡В簦颍铮睿螅悖颍椋穑簦螅铮颍掊义希苠澹澹希兀校龋希渝澹螅酰猓酰睿椋簦筮姡娗汕纱Ｇ�，１於）逡逑Ｘ，－：的ｘＷａｔｉｏｎ邐／邋１３邋ｍＲＮＡＯＸＰＨＯＳ邋（加拉逡逑圖１－３線粒體的生物合脅＂］逡逑Ｆｉｇ．邋１－３邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ邋ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ逡逑４N２邋ＰＧＣ－ｌａ蛋白對(duì)線粒體功能的影響逡逑１０逡逑

脫氨來(lái)提供反應(yīng)過(guò)程需要的氨。膽固醇的合成反應(yīng)是耗能反應(yīng)，因此也需要腺嘿嶺核逡逑巧蘭a愃幔ǎ粒裕校├垂┠�。诞吀胞脑懆固醇含量详憮�(dān)櫻茫粒校櫻遙爬篩春銜鋦階諾礁咤義隙逋瓿桑櫻遙牛攏腥牒�，碟X詰ü檀己銑擅溉紓齲停牽妹窕虻謀澩錚ㄍ跡玻保ｅ義現(xiàn)淼募∪庵校齲停牽茫一虻謀澩鎘胙褐械ü檀�、高和低密度脂蛋白、肌闹u盡㈠義隙案櫓舅岷砍燒喙�。而执X臥嘀校齲停牽妹窕虻謀澩鎘胙褐懈咼芏戎鞍�、辶x蟳嵦迨萑飴�、觽}(cāng)岷砍篩合喙兀簦鰨欏Ｔ諏俅倉(cāng)吻篩哐⑹褂盟±嘁┪鍤蓖義銑魷旨〔”浜蛻儆械暮崳萍∪芙�。大鼠腹腔注蓽O±嘁┪鎦瘟聘咧⑹幣鵂∪忮義希齲停牽妹衩富钚緣南陸擔(dān)校保靛澹サ募∠宋櫻桑歟廡拖潁桑歟幔妥洌郟保常梗蕁９賾詡Γ齲停牽妹皴義匣虻難芯坎⒉歡�，高饲养密度和限饲应激引迄]春郊α薌合赴齲停牽妹窈停齲櫻校蠡義弦蟣澩鍔仙�，ＤＮＡ所査加炯傉Ｗ。此外，｝x停牽妹窕蠐肴餳Φ納�、肉质、脂沉积辶x希郟椋綴筒傲浚郟保矗玻庇泄�，当｝x停牽妹竦模場(chǎng)眨裕腋霰鵂罨壞閫槐浜笱現(xiàn)賾跋炱淶ü檀煎義洗鷳 ｗｊ。逡逑２．２膽固醇的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)逡逑日糧中醋化的膽固醇必須在腸腔內(nèi)水解為游離的膽固醇，進(jìn)入小腸上皮細(xì)胞與載逡逑脂蛋白形成脂蛋白微粒隨后經(jīng)淋己管進(jìn)入血液循環(huán)，最后進(jìn)入肝臟。肝臟將絕大部分逡逑的游離膽固醇同其它中性脂質(zhì)一起與載脂蛋白裝配成極低密度脂蛋白膽固醇（Ｖｅｒｙ逡逑ｌｏｗ邋ｄｅｎｓｉｔｙ邋ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ邋ｃｈｏｌｅｓｔｅｒａｌ，邋ＶＬＤＬＣ）分泌進(jìn)入血液。ＶＬＤＬＣ邋在脂蛋白醋酶逡逑的作用下快速生成低密度脂蛋白膽固醇（Ｌｏｗ邋ｄｅｎｓｈｙ邋ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ邋ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S831

【參考文獻(xiàn)】

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1 Chunyan Guo;Li Sun;Xueping Chen;Danshen Zhang;;Oxidative stress, mitochondrial damage and neurodegenerative diseases[J];Neural Regeneration Research;2013年21期

本文編號(hào)：2523899