【摘要】：本實驗依據(jù)益生菌篩選的常規(guī)方法和凝結(jié)芽孢桿菌的判定標(biāo)準(zhǔn),旨在從健康仔豬糞便中分離獲得益生性能優(yōu)良且安全的益生凝結(jié)芽孢桿菌,并通過體外模擬動物腸道環(huán)境,評價其益生特性和應(yīng)用特點(diǎn)。本研究從70余株豬源芽孢桿菌中篩選鑒定出4株凝結(jié)芽孢桿菌,分別命名為BC147、BC235、BC303和BC310。結(jié)果表明:4株菌對大腸桿菌K88,雞腸炎沙門菌,豬腸炎沙門菌,金黃色葡萄球菌,鼠傷寒沙門菌均表現(xiàn)出良好的抑菌作用。益生及耐受性研究發(fā)現(xiàn),四株菌均具有良好黏附能力,并對膽鹽和低酸環(huán)境表現(xiàn)出較強(qiáng)的耐受能力,其中BC303對仔豬腸黏液的黏附率高達(dá)41.67%,在p H 4的條件下其營養(yǎng)細(xì)胞存活率高達(dá)91.0%,在0.3%膽鹽中暴露2 h,其存活率仍然維持在40%以上。同時,四株菌均具有一定的蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶產(chǎn)生能力。結(jié)果顯示,從健康仔豬腸道及糞便分離篩選獲得的凝結(jié)芽孢桿菌具有良好的益生性和安全性,其在畜禽養(yǎng)殖中具有廣泛應(yīng)用前景。
【圖文】：

所測試的腸道常見病原菌大腸桿菌K88（E.coliK88），雞腸炎沙門氏菌（S.enteritidis）O:1,9,12，豬腸炎沙門氏菌（S.enteritidis）O4Hi，，金黃色葡萄球菌（S.aureus）ATCC29213和鼠傷寒沙門氏菌（S.typhimurium）ATCC13311均表現(xiàn)出拮抗作用，其中對鼠傷寒沙門氏菌拮抗效應(yīng)最為明顯。4株菌對同一病原菌間的抑菌效果差異不顯著。2.3黏附性益生菌進(jìn)入腸道后，通過黏附在腸黏膜上抑制致病菌的定植，并與腸道黏膜細(xì)胞共同構(gòu)成生物屏障，改善腸道微生態(tài)平衡，保護(hù)宿主抵御外來微生物的入侵[7]。圖2顯示，4株凝結(jié)芽孢桿菌圖1BC147、BC235、BC310和BC303的16SrDNA基因序列的系統(tǒng)發(fā)育樹對豬腸黏液均有不同程度的黏附性能，其中BC303對腸黏液的黏附能力最強(qiáng)，達(dá)41.67%±3.73％，良好的黏附性決定其更好的發(fā)揮其益生特性。2.4耐酸及耐膽鹽特性動物腸胃道酸度為pH2~3，小腸接近中性達(dá)到pH5~7，因此本研究中耐酸性實驗的pH控制在1~5。凝結(jié)芽孢桿菌營養(yǎng)細(xì)胞在不同pH環(huán)境下暴露2h后的存活率見圖3所示。由圖3可知，4株菌在pH1~2的極端條件下暴露2h后仍有15%以上的存活率，在pH3時BC147耐受性急劇增加，存活率達(dá)到78.0%±5.8％；而BC303在pH4時其營養(yǎng)細(xì)胞存活率回復(fù)到了91%±3.5％。由此可見，分離獲得的4株凝結(jié)凝結(jié)芽孢桿菌具有較強(qiáng)的耐酸受能力，在pH3以上均能很好存活，當(dāng)芽孢通過胃酸環(huán)境進(jìn)入小腸后在pH5~7的小腸環(huán)境中可順利萌發(fā)和增殖，為其益生特性的發(fā)揮奠定了圖2實驗菌株對腸黏液的黏附率（n=3）圖3菌株對酸的耐受性（n=3）圖4菌株對膽鹽的耐受性（n=3）

實驗，結(jié)果見表2。4株菌對所測試的腸道常見病原菌大腸桿菌K88（E.coliK88），雞腸炎沙門氏菌（S.enteritidis）O:1,9,12，豬腸炎沙門氏菌（S.enteritidis）O4Hi，金黃色葡萄球菌（S.aureus）ATCC29213和鼠傷寒沙門氏菌（S.typhimurium）ATCC13311均表現(xiàn)出拮抗作用，其中對鼠傷寒沙門氏菌拮抗效應(yīng)最為明顯。4株菌對同一病原菌間的抑菌效果差異不顯著。2.3黏附性益生菌進(jìn)入腸道后，通過黏附在腸黏膜上抑制致病菌的定植，并與腸道黏膜細(xì)胞共同構(gòu)成生物屏障，改善腸道微生態(tài)平衡，保護(hù)宿主抵御外來微生物的入侵[7]。圖2顯示，4株凝結(jié)芽孢桿菌圖1BC147、BC235、BC310和BC303的16SrDNA基因序列的系統(tǒng)發(fā)育樹對豬腸黏液均有不同程度的黏附性能，其中BC303對腸黏液的黏附能力最強(qiáng)，達(dá)41.67%±3.73％，良好的黏附性決定其更好的發(fā)揮其益生特性。2.4耐酸及耐膽鹽特性動物腸胃道酸度為pH2~3，小腸接近中性達(dá)到pH5~7，因此本研究中耐酸性實驗的pH控制在1~5。凝結(jié)芽孢桿菌營養(yǎng)細(xì)胞在不同pH環(huán)境下暴露2h后的存活率見圖3所示。由圖3可知，4株菌在pH1~2的極端條件下暴露2h后仍有15%以上的存活率，在pH3時BC147耐受性急劇增加，存活率達(dá)到78.0%±5.8％；而BC303在pH4時其營養(yǎng)細(xì)胞存活率回復(fù)到了91%±3.5％。由此可見，分離獲得的4株凝結(jié)凝結(jié)芽孢桿菌具有較強(qiáng)的耐酸受能力，在pH3以上均能很好存活，當(dāng)芽孢通過胃酸環(huán)境進(jìn)入小腸后在pH5~7的小腸環(huán)境中可順利萌發(fā)和增殖，為其益生特性的發(fā)揮奠定了圖2實驗菌株對腸黏液的黏附率（n=3）圖3菌株對酸的耐受性（n=3）圖4菌株對膽鹽的耐受性（n=3）
【作者單位】： 河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院;
【基金】：國家級大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計劃項目資助(201510464024) 河南省重點(diǎn)科技攻關(guān)項目資助(162102210199)
【分類號】：S816.7

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本文編號：2520525