【摘要】：奶牛乳房炎是危害奶牛產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要疾病之一,給奶牛業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。金黃色葡萄球菌是導(dǎo)致奶牛乳房炎重要的致病菌,耐藥菌株的出現(xiàn)嚴(yán)重阻礙了該病的治療。黏附素可在金黃色葡萄球菌早期感染過(guò)程中發(fā)揮重要作用,FnBPA是該菌重要的黏附素之一。本研究以金黃色葡萄球菌FnBPA-A不同遺傳多態(tài)性重組質(zhì)粒為研究對(duì)象,旨在闡明FnBPA-A分子遺傳多態(tài)性與其免疫生物學(xué)特性的關(guān)系。本研究在對(duì)牛乳源金黃色葡萄球菌黏附素FnBPA-A序列分析的基礎(chǔ)上,利用構(gòu)建的FnBPA-A不同遺傳多態(tài)性重組質(zhì)粒對(duì)小鼠進(jìn)行免疫,比較分析其免疫生物學(xué)特性。檢測(cè)結(jié)果表明,FnBPA-A不同遺傳多態(tài)性重組質(zhì)粒免疫小鼠后抗血清對(duì)不同金黃色葡萄球菌的識(shí)別能力不同。檢測(cè)結(jié)果還顯示,FnBPA-A不同遺傳多態(tài)性重組質(zhì)粒免疫后的抗血清可對(duì)金黃色葡萄球菌粘附纖維蛋白原(Fg)表現(xiàn)顯著抑制作用(P0.05),但FnBPA-A不同遺傳多態(tài)性重組質(zhì)粒抗血清之間在抗粘附效果方面差異不顯著(P0.05),不同重組質(zhì)粒刺激淋巴細(xì)胞增殖能力和IFN-γ水平表現(xiàn)不同程度的升高。不同重組質(zhì)粒免疫后小鼠免疫保護(hù)力不同,并且與細(xì)胞免疫水平相關(guān)。本研究選用奶牛乳腺組織塊接種法與胰蛋白酶消化分離培養(yǎng)及純化牛乳腺上皮細(xì)胞。通過(guò)對(duì)特異性的角蛋白18進(jìn)行鑒定,證明純化的細(xì)胞為牛乳腺上皮細(xì)胞。并進(jìn)一步測(cè)定得出純化后的牛乳腺上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)。利用熒光染料CFSE和DiI分別對(duì)金黃色葡萄球菌與乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行染色,在激光共聚焦顯微鏡下觀察金黃色葡萄球菌對(duì)牛乳腺上皮細(xì)胞的粘附。比較4株不同金黃色葡萄球菌分離株對(duì)牛乳腺上皮細(xì)胞的粘附能力,結(jié)果表明不同金黃色葡萄球菌分離株對(duì)牛乳腺上皮細(xì)胞的粘附能力不同,其中GY278分離株對(duì)乳腺上皮細(xì)胞的粘附能力最強(qiáng),并且與其它分離株差異顯著(P0.05)。進(jìn)一步利用培養(yǎng)的牛乳腺上皮細(xì)胞檢測(cè)與分析FnBPA-A不同遺傳多態(tài)性重組質(zhì)粒免疫后抗血清對(duì)4株不同金黃色葡萄球菌分離株粘附乳腺上皮細(xì)胞的影響。結(jié)果顯示,FnBPA-A不同遺傳多態(tài)性重組質(zhì)粒免疫后抗血清能夠抑制金黃色葡萄球菌粘附乳腺上皮細(xì)胞,不同的FnBPA-A遺傳多態(tài)性抗血清抑制能力存在差異,同一FnBPA-A遺傳多態(tài)性抗血清抑制不同金黃色葡萄球菌粘附乳腺上皮細(xì)胞差異不顯著(P0.05)。本研究為金黃色葡萄球菌免疫學(xué)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Dairy cow mastitis is one of the important diseases which is harmful to the healthy development of dairy cattle industry, and has caused great economic loss to the dairy cattle industry. Staphylococci are the most important pathogenic bacteria in the mastitis of dairy cows, and the emergence of drug-resistant strains has seriously hindered the treatment of the disease. The adhesive can play an important role in the early infection of Staphylococcus aureus, and the FnBPA is one of the important adhesin of the bacterium. The purpose of this study was to study the relationship between the molecular genetic polymorphism of FnBPA-A and its biological characteristics. On the basis of the analysis of the FnBPA-A sequence of the Staphylococcus aureus in the milk source, the mice were immunized with the constructed FnBPA-A different genetic polymorphism recombinant plasmid, and the biological characteristics of the mice were compared. The results showed that the identification ability of the antiserum to different S. aureus was different after the recombinant plasmid of FnBPA-A with different genetic polymorphism. The results also showed that the anti-serum of FnBPA-A with different genetic polymorphisms (FnBPA-A) could significantly inhibit the adhesion of fibrinogen (Fg) to Staphylococcus aureus (P0.05). However, there was no significant difference in the anti-adhesion effect between the recombinant plasmid of FnBPA-A and the recombinant plasmid (P0.05). The immune protective force of the mice after immunization with different recombinant plasmids was different and correlated with the cellular immune level. In this study, bovine mammary gland epithelial cells were isolated and cultured with trypsin digestion. The purified cells are proved to be bovine mammary epithelial cells by the identification of specific keratin 18. And further determining the growth curve of the purified bovine mammary epithelial cell. Staphylococcus aureus and mammary epithelial cells were stained with CFSE and DiI respectively, and the adhesion of Staphylococcus aureus to bovine mammary epithelial cells was observed under a laser confocal microscope. The adhesion ability of 4 strains of different S. aureus isolates to bovine mammary epithelial cells was compared. The results showed that the adhesion of different S. aureus isolates to bovine mammary epithelial cells was different, among which GY278 isolates had the strongest adhesion to the epithelial cells of the breast. And the difference with other isolates was significant (P0.05). The effect of the antiserum on the adhesion of 4 strains of different S. aureus isolates to the mammary epithelial cells was further investigated and analyzed using the cultured bovine mammary epithelial cells. The results showed that the anti-serum of FnBPA-A can inhibit the adhesion of the Staphylococcus aureus to the mammary epithelial cells, and the inhibitory ability of the different FnBPA-A genetic polymorphism antisera is different. The antisera of the same FnBPA-A polymorphism did not significantly inhibit the adhesion of different S. aureus to the epithelial cells (P0.05). This study provides an experimental basis for the immunological study of Staphylococcus aureus.
【學(xué)位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S852.611

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本文編號(hào)：2504240