【摘要】：為制備高活性的犬干擾素α4(CaIFN-α4),將犬IFN-α4和綠色熒光蛋白(GFP)基因用2個GGGGS五肽柔性肽連接,獲得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP)。將該融合基因與真核表達載體pLeGFP連接,構建重組表達質粒pL-CaIFN-α4-GFP,并與其他3種慢病毒質粒(pC-Gp,pR-Rev和pC-VsvG)共同轉染293FT細胞,包裝獲得重組慢病毒(vCaIFN-α4-GFP)。用獲得的重組慢病毒感染中國倉鼠卵巢(CHO)細胞,經(jīng)殺稻瘟菌素篩選、流式細胞儀分選和有限稀釋法克隆轉染細胞,獲得表達CaIFN-α4-GFP的CHO細胞。用熒光顯微鏡觀察構建的CHO細胞呈現(xiàn)綠色熒光,用MDCK與MDB K細胞檢測CHO細胞培養(yǎng)上清液具有抗水皰性口炎病毒活性,活性分別為1.39×105和2.19×104U/m L。本研究成功地利用CHO細胞表達了具有活性的犬干擾素α4,為進一步研制高活性的犬IFN-α4生產系統(tǒng)奠定了試驗基礎。
[Abstract]:In order to prepare highly active canine interferon 偽 4 (CaIFN- 偽 4), canine IFN- 偽 4 and green fluorescent protein (GFP) gene were ligated with two GGGGS pentapeptide flexible peptides to obtain the fusion gene of dog IFN- 偽 4 and GFP (CaIFN- 偽 4 GFP). The fusion gene was ligated with eukaryotic expression vector pLeGFP, and the recombinant expression plasmid pL-CaIFN- 偽 4-GFP, was constructed and co-transfected into 293FT cells with three other lentivirus plasmids (pC-Gp,pR-Rev and pC-VsvG). Recombinant lentivirus (vCaIFN- 偽 4-GFP).) was obtained by packaging Chinese hamster ovarian (CHO) cells were infected with recombinant lentivirus. CHO cells expressing CaIFN- 偽 4-GFP were cloned by flow cytometry and limited dilution. The green fluorescence of CHO cells was observed by fluorescence microscope. MDCK and MDB K cells were used to detect the antivesicular stomatitis virus activity of CHO cells, which were 1.39 脳 10 ~ 5 and 2.19 脳 104U/m L, respectively. In this study, the active canine interferon 偽 4 was successfully expressed by CHO cells, which laid an experimental foundation for the further development of a highly active canine interferon 偽 4 production system.
【作者單位】： 南京農業(yè)大學動物醫(yī)學院;江蘇省農業(yè)科學院獸醫(yī)研究所農業(yè)部獸用生物制品工程技術重點實驗室國家獸用生物制品工程技術研究中心;
【基金】：國家重點研發(fā)計劃項目(2016YFD0501000) 公益性行業(yè)(農業(yè))科研專項(201303042) 江蘇省農業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項目[CX(15)1065]
【分類號】：S858.292

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉云志;趙秋峰;楊金生;柴方紅;黃海楠;;動物干擾素的研究與應用[J];中國畜禽種業(yè);2011年09期

2 戰(zhàn)大偉;牛春;顏克松;李潔;徐晨;劉金毅;;重組人干擾素α1b噴霧劑皮膚局部藥代動力學研究[J];中國畜牧獸醫(yī);2012年10期

3 ;淋巴因子和干擾素[J];生物技術通報;1990年08期

4 梁斌;國內動物干擾素的研究進展[J];甘肅畜牧獸醫(yī);2005年02期

5 王艷曉;羅滿林;;豬干擾素在臨床生產中的應用[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2011年06期

6 ;淋巴因子和干擾素[J];生物技術通報;1989年08期

7 任玉瑩;范泉水;邱薇;李作生;鄭穎;張富強;杜強;余方芳;;基因工程犬干擾素α的制備及純化工藝[J];生物技術通訊;2009年01期

8 柏森;;小議干擾素[J];北方牧業(yè);2009年10期

9 石曉麗,張雪梅,王曉宇;重組人干擾素α_(2a)軟膏的動物皮膚試驗[J];生物學雜志;2003年06期

10 朱遐;;可治療某些慢性乙型肝炎患者的干擾素α—2b[J];生物技術通報;1991年02期

相關會議論文 前10條

1 周岳進;;慢性乙型病毒性肝炎干擾素初治失敗后的治療[A];中國中西醫(yī)結合學會第十二次全國消化系統(tǒng)疾病學術研討會論文匯編[C];2000年

2 賈珍容;徐雪元;閔e，

本文編號：2492086