【摘要】：為制備高活性的犬干擾素α4(CaIFN-α4),將犬IFN-α4和綠色熒光蛋白(GFP)基因用2個GGGGS五肽柔性肽連接,獲得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP)。將該融合基因與真核表達載體pLeGFP連接,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pL-CaIFN-α4-GFP,并與其他3種慢病毒質(zhì)粒(pC-Gp,pR-Rev和pC-VsvG)共同轉(zhuǎn)染293FT細胞,包裝獲得重組慢病毒(vCaIFN-α4-GFP)。用獲得的重組慢病毒感染中國倉鼠卵巢(CHO)細胞,經(jīng)殺稻瘟菌素篩選、流式細胞儀分選和有限稀釋法克隆轉(zhuǎn)染細胞,獲得表達CaIFN-α4-GFP的CHO細胞。用熒光顯微鏡觀察構(gòu)建的CHO細胞呈現(xiàn)綠色熒光,用MDCK與MDB K細胞檢測CHO細胞培養(yǎng)上清液具有抗水皰性口炎病毒活性,活性分別為1.39×105和2.19×104U/m L。本研究成功地利用CHO細胞表達了具有活性的犬干擾素α4,為進一步研制高活性的犬IFN-α4生產(chǎn)系統(tǒng)奠定了試驗基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to prepare highly active canine interferon 偽 4 (CaIFN- 偽 4), canine IFN- 偽 4 and green fluorescent protein (GFP) gene were ligated with two GGGGS pentapeptide flexible peptides to obtain the fusion gene of dog IFN- 偽 4 and GFP (CaIFN- 偽 4 GFP). The fusion gene was ligated with eukaryotic expression vector pLeGFP, and the recombinant expression plasmid pL-CaIFN- 偽 4-GFP, was constructed and co-transfected into 293FT cells with three other lentivirus plasmids (pC-Gp,pR-Rev and pC-VsvG). Recombinant lentivirus (vCaIFN- 偽 4-GFP).) was obtained by packaging Chinese hamster ovarian (CHO) cells were infected with recombinant lentivirus. CHO cells expressing CaIFN- 偽 4-GFP were cloned by flow cytometry and limited dilution. The green fluorescence of CHO cells was observed by fluorescence microscope. MDCK and MDB K cells were used to detect the antivesicular stomatitis virus activity of CHO cells, which were 1.39 脳 10 ~ 5 and 2.19 脳 104U/m L, respectively. In this study, the active canine interferon 偽 4 was successfully expressed by CHO cells, which laid an experimental foundation for the further development of a highly active canine interferon 偽 4 production system.
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院;江蘇省農(nóng)業(yè)科學院獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點實驗室國家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心;
【基金】：國家重點研發(fā)計劃項目(2016YFD0501000) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201303042) 江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項目[CX(15)1065]
【分類號】：S858.292

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本文編號：2492086