【摘要】：羊口瘡又稱羊傳染性膿皰性皮炎,由羊口瘡病毒(Orf virus,ORFV)引起,ORFV屬于痘病毒科副痘病毒屬,主要侵襲皮膚和黏膜。ORFV主要感染綿羊和山羊等動物,嚴重影響?zhàn)B羊業(yè)的發(fā)展,對人類健康也造成威脅。可以通過接種疫苗來控制羊口瘡的發(fā)生,但存在滅活苗效果差,弱毒苗毒力返強等問題,而且不同地區(qū)的羊口瘡毒株存在差異,不能很好的保護羊群。因此,對本地區(qū)的ORFV開展研究具有重要意義。1.采集海南某場羊口瘡水泡痂皮,克隆ORFV的B2L、VIR和F1L基因,進行遺傳進化樹分析。結果表明,發(fā)現(xiàn)其與福建株和西北株的親緣關系較近。2.以ORFV基因組為模板,通過PCR技術擴增B2L和F1L片段,構建原核表達質粒 pET28a-B2L 和 pET28a-F1L,通過 Ni-NTA 柱純化 His-B2L 和 His-F1L 融合蛋白,進行SDS-PAGE和Western Blot檢測。結果表明,成功構建重組質粒pET28a-B2L和pET28a-F1L,經(jīng)IPTG誘導成功表達了帶His標簽的融合蛋白,融合蛋白His-B2L分子量約47 kDa,融合蛋白His-F1L分子量約44 kDa。3.通過PCR技術擴增B2L和F1L片段,構建真核表達質粒pEGFP-N1-B2L和pEGFP-N1-F1L,轉染羊睪丸細胞,進行熒光顯微鏡觀察,qRT-PCR檢測和Western Blot鑒定。結果表明,成功構建了真核表達質粒pEGFP-N1-B2L和pEGFP-N1-F1L,成功表達了 EGFP-B2L和EGFP-F1L融合蛋白,為B2L和F1L蛋白的研究奠定基礎。4.用純化的融合蛋白制備抗原,經(jīng)皮下多點注射新西蘭大白兔,制備兔抗His-B2L和His-F1L多克隆抗體,用ELISA方法檢測多克隆抗體效價。結果表明,獲得的兔抗多克隆抗體效價均在1:12800以上且具有較好的特異性。
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【學位授予單位】：海南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

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本文編號：2471247