【摘要】：羊口瘡又稱羊傳染性膿皰性皮炎,由羊口瘡病毒(Orf virus,ORFV)引起,ORFV屬于痘病毒科副痘病毒屬,主要侵襲皮膚和黏膜。ORFV主要感染綿羊和山羊等動(dòng)物,嚴(yán)重影響?zhàn)B羊業(yè)的發(fā)展,對(duì)人類健康也造成威脅�？梢酝ㄟ^(guò)接種疫苗來(lái)控制羊口瘡的發(fā)生,但存在滅活苗效果差,弱毒苗毒力返強(qiáng)等問(wèn)題,而且不同地區(qū)的羊口瘡毒株存在差異,不能很好的保護(hù)羊群。因此,對(duì)本地區(qū)的ORFV開展研究具有重要意義。1.采集海南某場(chǎng)羊口瘡水泡痂皮,克隆ORFV的B2L、VIR和F1L基因,進(jìn)行遺傳進(jìn)化樹分析。結(jié)果表明,發(fā)現(xiàn)其與福建株和西北株的親緣關(guān)系較近。2.以O(shè)RFV基因組為模板,通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增B2L和F1L片段,構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒 pET28a-B2L 和 pET28a-F1L,通過(guò) Ni-NTA 柱純化 His-B2L 和 His-F1L 融合蛋白,進(jìn)行SDS-PAGE和Western Blot檢測(cè)。結(jié)果表明,成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-B2L和pET28a-F1L,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)成功表達(dá)了帶His標(biāo)簽的融合蛋白,融合蛋白His-B2L分子量約47 kDa,融合蛋白His-F1L分子量約44 kDa。3.通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增B2L和F1L片段,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-N1-B2L和pEGFP-N1-F1L,轉(zhuǎn)染羊睪丸細(xì)胞,進(jìn)行熒光顯微鏡觀察,qRT-PCR檢測(cè)和Western Blot鑒定。結(jié)果表明,成功構(gòu)建了真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-N1-B2L和pEGFP-N1-F1L,成功表達(dá)了 EGFP-B2L和EGFP-F1L融合蛋白,為B2L和F1L蛋白的研究奠定基礎(chǔ)。4.用純化的融合蛋白制備抗原,經(jīng)皮下多點(diǎn)注射新西蘭大白兔,制備兔抗His-B2L和His-F1L多克隆抗體,用ELISA方法檢測(cè)多克隆抗體效價(jià)。結(jié)果表明,獲得的兔抗多克隆抗體效價(jià)均在1:12800以上且具有較好的特異性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：海南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2471247