【摘要】：根據莢膜抗原分型,可將豬鏈球菌分為33個血清型。這種可形成鏈狀的革蘭氏陽性細菌廣泛分布于全球,對養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經濟損失,同時也被中國列為2類動物疫病,為人畜共患病原。由于血清型較多抗原復雜,常常給診斷帶來困難,其引起的臨床癥狀也是多種多樣的,如：急性敗血癥、腦膜炎、心內膜炎、肺炎、關節(jié)炎。目前,全球已經超過30多個國家報道豬或是人感染豬鏈球菌,然而,了解豬鏈球菌的分布情況,不僅是為了弄清其如今流行的形勢,更是為了評估當前區(qū)域流行的原因。本研究旨在了解婁底地區(qū)豬鏈球菌流行情況,并根據調查結果針對婁底地區(qū)的調查結果建立多重PCR診斷方法,為豬鏈球菌的防治提供科學依據。從婁底市的婁星區(qū)、新化縣、漣源市、雙峰縣、冷水江市等地采集豬鼻拭子400份,經增菌分離培養(yǎng)、革蘭染色鏡檢、PCR鑒定豬鏈球菌種及分離菌株血清型鑒定。結果表明,從400份鼻拭子樣品中共檢出有239份豬鏈球菌陽性樣品,陽性率為59.75%,本次共檢出21個型的豬鏈球菌,分別是1型、2型、3型、4型、5型、7型、8型、10型、11型、13型、15型、17型、18型、20型、21型、23型、26型、28型、29型、30型、31型。其中,豬鏈球菌3型的檢出率最高,達8.25%,其余檢測率較高的依次為：2型達6.75%,8型達5.75%,7型達4.75%,23型達4.50%,21型達3.75%,10型達3.25%,1型達2.00%,26型達1.50%,11型達1.00%。由此表明,婁底市正常豬群中豬攜帶的豬鏈球菌血清型呈現復雜多樣的特點。根據婁底市流行病學調查的情況,建立豬鏈球菌3型、8型、21型及23型的多重PCR診斷方法。參考GenBank上已登錄序列,針對豬鏈球菌特異性基因(莢膜多糖,3型CPS3L,8型CPS8K,21型CPS21I,23型CPS23J)設計合成4對引物,預計擴增片段大小分別為：210,278,618,487bp。通過設置巴氏桿菌,丹毒絲菌,葡萄球菌,大腸桿菌和水來驗證多重PCR方法的特異性；用豬鏈球菌3型、8型、21型及23型來驗證多重PCR方法的準確性；梯度稀釋模板來確定多重PCR方法的敏感性；結果表明,多重PCR方法在退火溫度為55℃可以擴增出4條大小符合預期的條帶。方法的特異性和準確性都預期相符,敏感性為1.2×102CFU/mL。5次重復性實驗結果一致。本次所建立的多重PCR方法高效,適合用來監(jiān)測婁底市的養(yǎng)豬場的豬鏈球菌流行情況。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：湖南農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S858.28

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