發(fā)布時(shí)間：2019-04-17 11:29

【摘要】：根據(jù)莢膜抗原分型,可將豬鏈球菌分為33個(gè)血清型。這種可形成鏈狀的革蘭氏陽性細(xì)菌廣泛分布于全球,對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,同時(shí)也被中國列為2類動(dòng)物疫病,為人畜共患病原。由于血清型較多抗原復(fù)雜,常常給診斷帶來困難,其引起的臨床癥狀也是多種多樣的,如：急性敗血癥、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、肺炎、關(guān)節(jié)炎。目前,全球已經(jīng)超過30多個(gè)國家報(bào)道豬或是人感染豬鏈球菌,然而,了解豬鏈球菌的分布情況,不僅是為了弄清其如今流行的形勢,更是為了評(píng)估當(dāng)前區(qū)域流行的原因。本研究旨在了解婁底地區(qū)豬鏈球菌流行情況,并根據(jù)調(diào)查結(jié)果針對(duì)婁底地區(qū)的調(diào)查結(jié)果建立多重PCR診斷方法,為豬鏈球菌的防治提供科學(xué)依據(jù)。從婁底市的婁星區(qū)、新化縣、漣源市、雙峰縣、冷水江市等地采集豬鼻拭子400份,經(jīng)增菌分離培養(yǎng)、革蘭染色鏡檢、PCR鑒定豬鏈球菌種及分離菌株血清型鑒定。結(jié)果表明,從400份鼻拭子樣品中共檢出有239份豬鏈球菌陽性樣品,陽性率為59.75%,本次共檢出21個(gè)型的豬鏈球菌,分別是1型、2型、3型、4型、5型、7型、8型、10型、11型、13型、15型、17型、18型、20型、21型、23型、26型、28型、29型、30型、31型。其中,豬鏈球菌3型的檢出率最高,達(dá)8.25%,其余檢測率較高的依次為：2型達(dá)6.75%,8型達(dá)5.75%,7型達(dá)4.75%,23型達(dá)4.50%,21型達(dá)3.75%,10型達(dá)3.25%,1型達(dá)2.00%,26型達(dá)1.50%,11型達(dá)1.00%。由此表明,婁底市正常豬群中豬攜帶的豬鏈球菌血清型呈現(xiàn)復(fù)雜多樣的特點(diǎn)。根據(jù)婁底市流行病學(xué)調(diào)查的情況,建立豬鏈球菌3型、8型、21型及23型的多重PCR診斷方法。參考GenBank上已登錄序列,針對(duì)豬鏈球菌特異性基因(莢膜多糖,3型CPS3L,8型CPS8K,21型CPS21I,23型CPS23J)設(shè)計(jì)合成4對(duì)引物,預(yù)計(jì)擴(kuò)增片段大小分別為：210,278,618,487bp。通過設(shè)置巴氏桿菌,丹毒絲菌,葡萄球菌,大腸桿菌和水來驗(yàn)證多重PCR方法的特異性；用豬鏈球菌3型、8型、21型及23型來驗(yàn)證多重PCR方法的準(zhǔn)確性；梯度稀釋模板來確定多重PCR方法的敏感性；結(jié)果表明,多重PCR方法在退火溫度為55℃可以擴(kuò)增出4條大小符合預(yù)期的條帶。方法的特異性和準(zhǔn)確性都預(yù)期相符,敏感性為1.2×102CFU/mL。5次重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。本次所建立的多重PCR方法高效,適合用來監(jiān)測婁底市的養(yǎng)豬場的豬鏈球菌流行情況。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.28

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本文編號(hào)：2459384