發(fā)布時(shí)間：2019-03-27 10:19

【摘要】：禽腺病毒(Fowl Adenovirus,FAdV)屬于腺病毒科禽腺病毒屬。根據(jù)限制性酶切圖譜以及血清交叉中和反應(yīng)性,目前FAdV可分為5個(gè)種(A-E),12個(gè)血清型(血清型1-7、8a、8b、9-11)。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),FAdV在世界范圍內(nèi)廣泛分布,且對不同日齡的家禽均表現(xiàn)為易感。FAdV感染一般引起亞臨床癥狀,而急性感染主要以包涵體肝炎、肝炎-心包積液綜合癥以及肌胃糜爛等為主。自2013年,國內(nèi)多個(gè)省份相繼爆發(fā)FAdV-4感染引起的包涵體肝炎-心包積液綜合征,對國內(nèi)養(yǎng)雞業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。為了解國內(nèi)流行FAdV-4的分子特征、致病特性,并建立血清學(xué)診斷方法,本研究在開展FAdV分離鑒定的基礎(chǔ)上,對部分FAdV-4禽腺病毒進(jìn)行了全基因組測序、致病性研究,并對FAdV-4的纖突1基因進(jìn)行了克隆表達(dá),建立了檢測FAdV-4抗體的間接免疫熒光方法。1.血清4型禽腺病毒FAdV-4分離鑒定及序列分析對2015年送檢的疑似禽腺病毒感染的樣品進(jìn)行了病毒分離鑒定。結(jié)果從國內(nèi)五個(gè)省份共分離、鑒定出了 9株禽腺病毒,其中一株為FAdV-8,其余均為FAdV-4,并對這8株FAdV-4分離株進(jìn)行了序列分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與國內(nèi)2013年FAdV-4分離株JSH13及JH13相比,這8株2015年FAdV-4分離株在基因ORF29均存在不同長度的缺失。其中一株病毒的ORF29有66個(gè)堿基對缺失,其余均缺失了 33個(gè)堿基對。與國外FAdV-4相比較,國內(nèi)FAdV-4分離株還存在一個(gè)1961nt的缺失。另外,國內(nèi)FAdV-4分離株的表面纖突蛋白1及纖突蛋白2與國外毒株的同源性分別為94.4%-94.7%及93.3%-94.5%。這些結(jié)果證明了國內(nèi)目前正流行新型FAdV-4。揭示這些基因組中的缺失或突變可能是導(dǎo)致國內(nèi)雞群FAdV-4流行、爆發(fā)的原因。2.血清4型禽腺病毒FAdV-4的致病性為探究FAdV-4分離株的致病特性,本研究對3株FAdV-4分離株(2015年分離株SD15、JSCZ15,2013年分離株JH13)在體內(nèi)外進(jìn)行了測定。在雞肝細(xì)胞上病毒生長特性表明,3毒株具有類似的病毒復(fù)制生長特性。SD15毒株在雞肝細(xì)胞上的病毒滴度可達(dá)1×108TCID50/mL。通過肌肉接種103TCID50病毒量,感染SD15、JSCZ15及JH13雞的致死率分別為80%,90%以及60%。泄殖腔排毒檢測發(fā)現(xiàn),感染雞排毒一直持續(xù)到感染后第10天。病死雞解剖可見典型的肝炎-心包積液綜合癥。肝臟組織切片HE染色可見肝細(xì)胞內(nèi)嗜堿性核內(nèi)包涵體,脂肪變性等特征病理變化。這些結(jié)果表明,這3個(gè)FAdV-4分離株為高致病性血清4型禽腺病毒。然這3個(gè)FAdV-4分離株的致病分子機(jī)制有待進(jìn)一步探究。3.檢測FAdV-4抗體的間接免疫熒光方法的初步建立對FAdV-4纖突蛋白F1進(jìn)行了 PCR擴(kuò)增,并利用商品化的重組酶ExnaseTM II快速重組連接,成功構(gòu)建了 FAdV-4纖突蛋白F1真核表達(dá)載體pcDNA3.1-F1。利用抗FAdV-4的雞陽性血清,分別通過間接免疫熒光和Western b1ot證明了 pcDNA3.1-F1真核載體的表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物纖突蛋白F1具有良好的抗原反應(yīng)性。將轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-F1、且表達(dá)纖突蛋白F1的293T細(xì)胞作為抗原,建立了檢測FAdV-4抗體的間接免疫熒光方法。特異性檢測發(fā)現(xiàn),該間接免疫熒光方法僅與所檢測的抗FAdV-4抗體反應(yīng),而與所檢測的抗雞馬立克病毒、禽白血病病毒、禽流感病毒、雞新城疫病毒、雞傳染性法氏囊炎病毒和雞傳染性支氣管炎病毒等病毒抗體不反應(yīng)。這些結(jié)果表明,基于纖突蛋白F1的檢測FAdV-4抗體的間接免疫熒光方法具有一定的應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2448096