發(fā)布時間：2019-03-26 21:25

【摘要】：根據(jù)本實驗室分離禽呼腸孤病毒(Avian reovirus,ARV)毒株和GenBank中已發(fā)布ARV標(biāo)準(zhǔn)毒株σC基因序列比對結(jié)果,在保守區(qū)域設(shè)計1對引物和1條特異性TaqMan探針。通過對反應(yīng)條件和反應(yīng)體系的優(yōu)化,建立的Real-time RT-PCR在1×10~1~1×10~(10) copies/μL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,靈敏度達(dá)到10 copies/μL,是常規(guī)PCR方法的100倍。本研究建立的RTPCR與其他禽病病原無交叉反應(yīng),且批間與批內(nèi)重復(fù)性試驗變異系數(shù)分別小于1%和2%,表明該方法具有良好的特異性和重復(fù)性。將本實驗室分離流行毒株MS01和標(biāo)準(zhǔn)毒株S1133感染SPF雞后,利用建立的Real-time RT-PCR對ARV在雞體內(nèi)組織臟器的分布及病毒載量進(jìn)行比較研究,結(jié)果表明,毒株MS01及S1133對SPF雞的致死率分別為80%和46.7%,兩株病毒均能在肝臟、脾臟、肺臟中有效復(fù)制,毒株MS01病毒載量明顯高于毒株S1133,但與毒株S1133不同,毒株MS01在腎臟組織中也能有效復(fù)制。本研究不僅為禽呼腸孤病毒的診斷提供了技術(shù)手段,也有利于進(jìn)一步探索流行毒株MS01高致病性的分子機(jī)制。
[Abstract]:According to the sequence alignment of 蟽 C gene of avian reovirus (Avian reovirus,ARV) strain isolated in our laboratory and ARV standard strain published in GenBank, a pair of primers and a specific TaqMan probe were designed in the conservative region. Through the optimization of the reaction conditions and reaction system, the established Real-time RT-PCR has a good linear relationship in the range of 1 脳 10 ~ 1 ~ 1 脳 10 ~ (10) copies/ 渭 L, and the sensitivity is up to 10 copies/ 渭 L, which is 100 times higher than that of the conventional PCR method. There was no cross-reaction between RTPCR and other pathogens in this study, and the coefficient of variation of inter-assay and intra-assay repeatability tests were less than 1% and 2%, respectively, indicating that the method has good specificity and repeatability. After SPF chickens were infected with MS01 and S1133, the distribution and viral load of ARV in the tissues and organs of the chickens were studied by using the established Real-time RT-PCR. The results showed that the distribution of ARV in the tissues and organs of chickens was compared with that of the standard strain S1133. The fatality rates of MS01 and S1133 strains to SPF chickens were 80% and 46.7%, respectively. The two strains could replicate effectively in liver, spleen and lung. The load of MS01 virus was significantly higher than that of S1133 strain, but different from S1133 strain. The strain MS01 can also replicate effectively in kidney tissue. This study not only provides a technical means for the diagnosis of avian reovirus, but also helps to explore the molecular mechanism of the high pathogenicity of MS01.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實驗室;
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項基金(CARS-42-G07)
【分類號】：S852.65

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本文編號：2447944