【摘要】：根據(jù)本實驗室分離禽呼腸孤病毒(Avian reovirus,ARV)毒株和GenBank中已發(fā)布ARV標準毒株σC基因序列比對結(jié)果,在保守區(qū)域設計1對引物和1條特異性TaqMan探針。通過對反應條件和反應體系的優(yōu)化,建立的Real-time RT-PCR在1×10~1~1×10~(10) copies/μL范圍內(nèi)具有良好的線性關系,靈敏度達到10 copies/μL,是常規(guī)PCR方法的100倍。本研究建立的RTPCR與其他禽病病原無交叉反應,且批間與批內(nèi)重復性試驗變異系數(shù)分別小于1%和2%,表明該方法具有良好的特異性和重復性。將本實驗室分離流行毒株MS01和標準毒株S1133感染SPF雞后,利用建立的Real-time RT-PCR對ARV在雞體內(nèi)組織臟器的分布及病毒載量進行比較研究,結(jié)果表明,毒株MS01及S1133對SPF雞的致死率分別為80%和46.7%,兩株病毒均能在肝臟、脾臟、肺臟中有效復制,毒株MS01病毒載量明顯高于毒株S1133,但與毒株S1133不同,毒株MS01在腎臟組織中也能有效復制。本研究不僅為禽呼腸孤病毒的診斷提供了技術手段,也有利于進一步探索流行毒株MS01高致病性的分子機制。
[Abstract]:According to the sequence alignment of 蟽 C gene of avian reovirus (Avian reovirus,ARV) strain isolated in our laboratory and ARV standard strain published in GenBank, a pair of primers and a specific TaqMan probe were designed in the conservative region. Through the optimization of the reaction conditions and reaction system, the established Real-time RT-PCR has a good linear relationship in the range of 1 脳 10 ~ 1 ~ 1 脳 10 ~ (10) copies/ 渭 L, and the sensitivity is up to 10 copies/ 渭 L, which is 100 times higher than that of the conventional PCR method. There was no cross-reaction between RTPCR and other pathogens in this study, and the coefficient of variation of inter-assay and intra-assay repeatability tests were less than 1% and 2%, respectively, indicating that the method has good specificity and repeatability. After SPF chickens were infected with MS01 and S1133, the distribution and viral load of ARV in the tissues and organs of the chickens were studied by using the established Real-time RT-PCR. The results showed that the distribution of ARV in the tissues and organs of chickens was compared with that of the standard strain S1133. The fatality rates of MS01 and S1133 strains to SPF chickens were 80% and 46.7%, respectively. The two strains could replicate effectively in liver, spleen and lung. The load of MS01 virus was significantly higher than that of S1133 strain, but different from S1133 strain. The strain MS01 can also replicate effectively in kidney tissue. This study not only provides a technical means for the diagnosis of avian reovirus, but also helps to explore the molecular mechanism of the high pathogenicity of MS01.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術國家重點實驗室;
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系建設專項基金(CARS-42-G07)
【分類號】：S852.65

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 謝芝勛,龐耀珊,劉加波,鄧顯文,謝志勤;用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應檢測禽呼腸孤病毒的研究[J];中國預防獸醫(yī)學報;1999年05期

2 江霞;王文學;;禽呼腸孤病毒病的防制[J];獸醫(yī)導刊;2014年03期

3 廖敏,李康然,謝芝勛;禽呼腸孤病毒分子生物學研究進展[J];廣西農(nóng)業(yè)生物科學;2000年02期

4 謝芝勛,廖敏,劉加波,鄧顯文,龐耀珊,謝志勤,唐小飛;禽呼腸孤病毒地高辛探針的制備及應用[J];中國預防獸醫(yī)學報;2001年06期

5 鄧顯文;謝芝勛;劉加波;龐耀珊;唐小飛;;禽呼腸孤病毒σ_2基因的克隆和表達[J];中國獸醫(yī)學報;2006年02期

6 張云;郝雪;耿宏偉;郭東春;;禽呼腸孤病毒99G株σB編碼基因的克隆及其在大腸桿菌中的高效表達[J];中國獸醫(yī)科學;2008年05期

7 鄧顯文;謝芝勛;謝麗基;謝志勤;劉加波;龐耀珊;;禽呼腸孤病毒σ_2基因的真核表達及其免疫效果研究[J];湖南農(nóng)業(yè)科學;2011年01期

8 李巨銀;胡新崗;魏寧;;禽呼腸孤病毒病的研究進展[J];甘肅畜牧獸醫(yī);2011年04期

9 趙振芬，徐為燕，，杜念興，薛恒平;禽呼腸孤病毒變異株的分離鑒定[J];中國病毒學;1996年04期

10 謝志勤;謝芝勛;劉加波;龐耀珊;鄧顯文;謝麗基;范晴;;禽呼腸孤病毒σ3蛋白單克隆抗體的制備及特性鑒定[J];華北農(nóng)學報;2013年01期

相關會議論文 前10條

1 王瑩;謝芝勛;劉加波;龐耀珊;鄧顯文;謝志勤;謝麗基;;禽呼腸孤病毒直接免疫熒光檢測方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十五次學術研討會論文集[C];2010年

2 王瑩;謝芝勛;劉加波;龐耀珊;鄧顯文;謝志勤;謝麗基;;禽呼腸孤病毒四種核酸檢測方法的比較[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十五次學術研討會論文集[C];2010年

3 鄧顯文;謝芝勛;劉加波;龐耀珊;唐小飛;;禽呼腸孤病毒σ2基因的克隆和表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第六次研討會論文集[C];2005年

4 鄧顯文;謝芝勛;劉加波;龐耀珊;唐小飛;;禽呼腸孤病毒σ_2基因的克隆和表達[A];第六屆全國會員代表大學暨第11次學術研討會論文集（下）[C];2005年

5 童桂香;謝芝勛;黃琦;文艷玲;謝麗基;龐耀珊;劉加波;鄧顯文;;禽呼腸孤病毒實時熒光定量RT-PCR檢測方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十四次學術研討會論文集[C];2008年

6 鄧顯文;謝芝勛;劉加波;龐耀珊;唐小飛;;禽呼腸孤病毒σ_2基因的克隆和表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學術研討會論文集[C];2005年

7 秦春香;謝芝勛;謝麗基;劉加波;龐耀珊;鄧顯文;謝志勤;;禽呼腸孤病毒δ_3和δ_2重組蛋白作為ELISA檢測抗原的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十四次學術研討會論文集[C];2008年

8 王瑩;謝芝勛;劉加波;龐耀珊;鄧顯文;謝志勤;謝麗基;;禽呼腸孤病毒RT-LAMP可視化檢測方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十五次學術研討會論文集[C];2010年

9 謝芝勛;廖敏;龐耀珊;謝志勤;鄧顯文;劉加波;李康然;;禽呼腸孤病毒S1基因擴增克隆與鑒定[A];第四屆中國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學術研討會論文集[C];2001年

10 畢研麗;王金良;郭廣君;呂素芳;楊慧;宋峰;苗立中;沈志強;;ARV、REV與ALV三重RT-PCR檢測方法的建立[A];第五屆中國畜牧科技論壇論文集[C];2011年

相關碩士學位論文 前10條

1 夏菁;表達禽呼腸孤病毒σB、σC蛋白的重組馬立克氏病毒的構(gòu)建[D];揚州大學;2015年

2 李晨曦;禽呼腸孤病毒p17蛋白在細胞中的定位與其誘導的自噬以及病毒復制相關[D];揚州大學;2015年

3 張劍銳;禽呼腸孤病毒σC、σB基因的克隆及表達[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2005年

4 木其爾;禽呼腸孤病毒基因組序列模體特征分析[D];內(nèi)蒙古大學;2012年

5 姜珂;禽呼腸孤病毒誘導細胞自噬的機制及其與病毒復制的關系[D];揚州大學;2012年

6 許秀梅;禽呼腸孤病毒半番鴨分離株單克隆抗體的制備[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2005年

7 祁海波;禽呼腸孤病毒M組基因的克隆與序列分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2008年

8 尹春紅;兩株禽呼腸孤病毒分離株生物學特性分析及間接ELISA方法的建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2014年

9 凌珊珊;禽呼腸孤病毒σC基因的克隆表達及其免疫原性初步研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2008年

10 黨娟;禽呼腸孤病毒L2基因的克隆與序列分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2012年

本文編號：2447944