【摘要】：消化道線蟲(Nematodes in digestive canal)主要寄生在牛(包括牦牛)、羊、駱駝等反芻動(dòng)物的消化道中。一般呈多蟲種混合感染,主要導(dǎo)致宿主消化道機(jī)械性損傷,并發(fā)胃腸道炎癥,食欲不振,貧血消瘦等癥狀,大量寄生時(shí)引起宿主消化道阻塞,嚴(yán)重時(shí)可造成宿主死亡,造成畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)的極大損失。準(zhǔn)確進(jìn)行消化道線蟲分類,研究其遺傳變異關(guān)系和種群特征,對(duì)消化道線蟲病的防治和病原學(xué)研究均有重要意義。本研究以采自天祝白牦牛小腸的3種線蟲為對(duì)象,從分子鑒定和遺傳變異的角度分別進(jìn)行了相關(guān)研究和分析。1.采用核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列擴(kuò)增和測(cè)序的方法,對(duì)采自甘肅省天�？h國(guó)家保種動(dòng)物白牦牛消化道的3種線蟲進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示腫孔古柏線蟲(Cooperia oncophora),環(huán)背帶線蟲(Teladorsagia circumcincta)和奧斯特線蟲sp.(Ostertagia sp.)的ITS序列長(zhǎng)度分別為779bp,791bp和765bp。三種線蟲ITS序列的種內(nèi)差異均在為0.5%以下。其中腫孔古柏線蟲與奧斯特線蟲的ITS序列差異最大,為13.6%~13.9%;腫孔古柏線蟲與環(huán)紋背帶線蟲ITS序列差異為12.9%-13.1%;環(huán)紋背帶線蟲和奧斯特線蟲ITS序列的差異最小,為4.3%~4.8%。通過對(duì)三種線蟲的ITS序列的比對(duì)分析可知,以ITS序列作為分子標(biāo)記可以對(duì)不同蟲種進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別。2.根據(jù)內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列的差異,利用PCR-RFLP技術(shù)成功建立了區(qū)分3種線蟲的分子生物學(xué)方法。結(jié)果顯示該技術(shù)可準(zhǔn)確將3種形態(tài)相近的線蟲區(qū)分。試驗(yàn)采用的限制性內(nèi)切酶分別是Nde I和Eco R V,通過兩次酶切反應(yīng)即將3種線蟲成功區(qū)別。其中,能被兩種酶切開的是腫孔古柏線蟲,只能被Nde I酶切開的是環(huán)背帶線蟲,兩種酶均無法切開的是奧斯特線蟲。相對(duì)于傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)方法,此方法有操作簡(jiǎn)便、區(qū)分效率高的特點(diǎn)。3.對(duì)采自甘肅省天�？h西大灘鄉(xiāng)和抓西秀龍鄉(xiāng)白牦牛小腸的14條環(huán)背帶線蟲nad6基因全序列進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序并分析。結(jié)果顯示,14條環(huán)背帶線蟲樣本的nad6全序列長(zhǎng)度均為438bp,核苷酸種內(nèi)差異為1.1-2.3%,氨基酸種內(nèi)差異為0.7%-2.7%;進(jìn)化樹顯示和環(huán)紋背帶線蟲日本株和印度株沒有明顯分支。對(duì)采自甘肅省天�？h西大灘鄉(xiāng)和抓西秀龍鄉(xiāng)白牦牛皺胃的15條腫孔古柏線蟲nad6基因全序列進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序并分析。結(jié)果顯示,15條腫孔古柏線蟲樣本的nad6全序列長(zhǎng)度均為438bp,核苷酸種內(nèi)差異為0.9-1.8%,氨基酸種內(nèi)差異0.7-1.4%;進(jìn)化樹顯示和腫孔古柏線蟲澳大利亞株有明顯分枝。4.對(duì)腫孔古柏線蟲天祝株的線粒體全基因組進(jìn)行了擴(kuò)增并測(cè)序,結(jié)果表明腫孔古柏線蟲線粒體全基因組長(zhǎng)度為13583bp,閉環(huán)結(jié)構(gòu),共包含36個(gè)基因,其中12個(gè)編碼蛋白的基因,22個(gè)t RNA,2個(gè)r RNA,無atp8基因。ITS序列比對(duì)顯示其和已發(fā)布的腫孔古柏線蟲的ITS序列差異在0.5%以下,但線粒體全序列和已發(fā)布的腫孔古柏線蟲GQ888713比對(duì)顯示差異為12.2%,超出了一般的種內(nèi)差異,可以將其視為腫孔古柏線蟲的姊妹種。本研究結(jié)果完善了腫孔古柏線蟲遺傳進(jìn)化的數(shù)據(jù)庫(kù)。本研究明確了甘肅省天�？h國(guó)家保種動(dòng)物白牦牛的三種常見胃腸道線蟲的ITS序列,nad6序列和部分蟲種的線粒體全基因組,并建立了區(qū)分這三種線蟲的分子生物學(xué)方法,同時(shí)分析了其遺傳進(jìn)化關(guān)系和群體結(jié)構(gòu),為我國(guó)的寄生蟲研究提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù),豐富了寄生蟲病的防治理論基礎(chǔ)。
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【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.7
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本文編號(hào)：2405534