【摘要】：為闡明細(xì)胞核仁蛋白NPM1與豬流行性腹瀉病毒(PEDV)核衣殼蛋白(N蛋白)共定位的關(guān)鍵位點。本實驗通過設(shè)計突變引物,利用重疊延伸PCR方法對NPM1氨基酸位點T199、K230和K263進(jìn)行定點突變,分別將其克隆至真核表達(dá)載體pDsRed2-N1中,獲得重組質(zhì)粒pDsRed2-NPM1(T199A)、pDsRed2-NPM1(K230R)、pDsRed2-NPM1(K263R)。隨后分別將pDsRed2-NPM1(WT)、pDsRed2-NPM1(T199A)、pDsRed2-NPM1(K230R)、pDsRed2-NPM1(K263R)與重組質(zhì)粒pAcGFP-N共轉(zhuǎn)染VeroE6細(xì)胞。共聚焦結(jié)果顯示NPM1(T199A)、NPM1(K230R)、野生型NPM1均與N蛋白共定位于細(xì)胞的核仁中。雖然NPM1(K263R)與N蛋白具有共定位現(xiàn)象,但兩者共定位于細(xì)胞核中。該實驗結(jié)果為進(jìn)一步研究核仁蛋白NPM1參與PEDV復(fù)制的分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:To elucidate the key loci of nucleolus protein (NPM1) co-localization with porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) nucleocapsid protein (N protein). In this experiment, the mutated primers were designed and the NPM1 amino acid sites T199K230 and K263 were mutated by overlapping extension PCR, and then cloned into the eukaryotic expression vector pDsRed2-N1 to obtain the recombinant plasmid pDsRed2-NPM1 (T199A). PDsRed2-NPM1 (K230R), pDsRed2-NPM1 (K263R). Then pDsRed2-NPM1 (WT), pDsRed2-NPM1 (T199A), pDsRed2-NPM1 (K230R), pDsRed2-NPM1 (K263R) and recombinant plasmid pAcGFP-N were co-transfected into VeroE6 cells. Confocal results showed that NPM1 (T199A), NPM1 (K230R) and wild-type NPM1 were colocated with N protein in nucleoli. Although NPM1 (K263R) and N protein are colocalized, they are co-located in the nucleus. The results laid a foundation for further study on the molecular mechanism of nucleolar protein NPM1 involved in PEDV replication.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點實驗室/豬消化道傳染病創(chuàng)新團(tuán)隊;
【基金】：國家自然基金優(yōu)秀青年基金項目(312220541)
【分類號】：S852.651

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 高慎陽;劉延慶;李一經(jīng);;豬流行性腹瀉病毒(PEDV)M蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2009年12期

2 古洪浪;鄧勝朝;崔進(jìn);劉曉露;劉超;袁航;馬嵐;張桂紅;;豬流行性腹瀉病毒PEDV-GD12株的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)雜志;2013年11期

3 杜曉莉;王一成;吳潤;徐麗華;袁秀芳;李軍星;周曉麗;;2010—2013年浙江省豬流行性腹瀉病毒臨床檢測及PEDV-S基因型分析[J];浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報;2014年03期

4 鄧祖麗穎;陳陸;;豬流行性腹瀉病毒巢式RT-PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年01期

5 李寶賢;馬廣鵬;葛俊偉;李一經(jīng);;豬流行性腹瀉病毒功能性受體的鑒定[J];病毒學(xué)報;2009年03期

6 ;Cloning the Structure Genes and Expression the N Gene of Porcine Epidemic Diarrhea Virus DX[J];Virologica Sinica;2009年03期

7 喬憲鳳,熊忠良,華文君,鄭新民;PEDV膜蛋白基因RT-PCR最適反應(yīng)條件的確立[J];湖北畜牧獸醫(yī);2001年01期

8 高慎陽;王s，

本文編號：2403577