【摘要】：為闡明細(xì)胞核仁蛋白NPM1與豬流行性腹瀉病毒(PEDV)核衣殼蛋白(N蛋白)共定位的關(guān)鍵位點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)設(shè)計(jì)突變引物,利用重疊延伸PCR方法對(duì)NPM1氨基酸位點(diǎn)T199、K230和K263進(jìn)行定點(diǎn)突變,分別將其克隆至真核表達(dá)載體pDsRed2-N1中,獲得重組質(zhì)粒pDsRed2-NPM1(T199A)、pDsRed2-NPM1(K230R)、pDsRed2-NPM1(K263R)。隨后分別將pDsRed2-NPM1(WT)、pDsRed2-NPM1(T199A)、pDsRed2-NPM1(K230R)、pDsRed2-NPM1(K263R)與重組質(zhì)粒pAcGFP-N共轉(zhuǎn)染VeroE6細(xì)胞。共聚焦結(jié)果顯示NPM1(T199A)、NPM1(K230R)、野生型NPM1均與N蛋白共定位于細(xì)胞的核仁中。雖然NPM1(K263R)與N蛋白具有共定位現(xiàn)象,但兩者共定位于細(xì)胞核中。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步研究核仁蛋白NPM1參與PEDV復(fù)制的分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:To elucidate the key loci of nucleolus protein (NPM1) co-localization with porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) nucleocapsid protein (N protein). In this experiment, the mutated primers were designed and the NPM1 amino acid sites T199K230 and K263 were mutated by overlapping extension PCR, and then cloned into the eukaryotic expression vector pDsRed2-N1 to obtain the recombinant plasmid pDsRed2-NPM1 (T199A). PDsRed2-NPM1 (K230R), pDsRed2-NPM1 (K263R). Then pDsRed2-NPM1 (WT), pDsRed2-NPM1 (T199A), pDsRed2-NPM1 (K230R), pDsRed2-NPM1 (K263R) and recombinant plasmid pAcGFP-N were co-transfected into VeroE6 cells. Confocal results showed that NPM1 (T199A), NPM1 (K230R) and wild-type NPM1 were colocated with N protein in nucleoli. Although NPM1 (K263R) and N protein are colocalized, they are co-located in the nucleus. The results laid a foundation for further study on the molecular mechanism of nucleolar protein NPM1 involved in PEDV replication.
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/豬消化道傳染病創(chuàng)新團(tuán)隊(duì);
【基金】：國(guó)家自然基金優(yōu)秀青年基金項(xiàng)目(312220541)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.651

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8 高慎陽(yáng);王s，

本文編號(hào)：2403577