【摘要】：根據(jù)豬環(huán)曲病毒N基因保守序列設(shè)計特異性引物與TaqMan探針,建立豬環(huán)曲病毒熒光定量RT-PCR檢測方法,并評價其特異性、敏感性和重復(fù)性。結(jié)果顯示,該方法能檢測豬環(huán)曲病毒,而對豬流行性腹瀉病毒、傳染性胃腸炎病毒、豬星狀病毒、A群豬輪狀病毒、豬博卡病毒、豬嵴病毒和偽犬病病毒等核酸的檢測均無交叉反應(yīng),具有良好的特異性;建立的定量標(biāo)準(zhǔn)曲線Ct值和模板終濃度在109~102copies/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,該方法檢測靈敏度可達(dá)102copies/L;重復(fù)性試驗(yàn)的組內(nèi)、組間的變異系數(shù)均小于2.5%。對88份豬糞便樣品進(jìn)行檢測,熒光定量RT-PCR檢出30份豬環(huán)曲病毒陽性,常規(guī)RT-PCR檢出28份豬環(huán)曲病毒陽性,兩種方法的符合率為93.34%。本研究建立的熒光定量RT-PCR可用于豬環(huán)曲病毒的快速檢測和流行病學(xué)調(diào)查。
[Abstract]:According to the conserved sequence of porcine cyclo virus N gene, specific primers and TaqMan probes were designed to establish a fluorescent quantitative RT-PCR assay for detection of porcine cyclopus virus, and to evaluate its specificity, sensitivity and reproducibility. The results showed that the method could be used to detect porcine cyclopyclovir, but to porcine epidemic diarrhea virus, transmissible gastroenteritis virus, porcine stellate virus, group A rotavirus, porcine Boca virus. The detection of porcine cristae virus and pseudocanine disease virus had no cross reaction and had good specificity. The Ct value of the established quantitative standard curve has a good linear relationship with the final concentration of the template in the range of 109~102copies/L. The sensitivity of the method can reach 102 copias / L, and the coefficient of variation between groups is less than 2.5 in the repeatability test group. Among 88 fecal samples, 30 were positive by fluorescent quantitative RT-PCR and 28 by routine RT-PCR. The coincidence rate of the two methods was 93.34. The fluorescent quantitative RT-PCR developed in this study can be used for rapid detection and epidemiological investigation of porcine Cyclovir.
【作者單位】： 浙江省動物疫病預(yù)防控制中心;
【基金】：浙江省公益技術(shù)研究項(xiàng)目(2016C32053)
【分類號】：S852.651

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本文編號：2402424