【摘要】：為了研究繁殖性狀相關(guān)基因促紅細胞生成素產(chǎn)生肝細胞配體A1受體(EphrinA1)和受體B2(EphB2)對梅山豬豬胚胎附植、產(chǎn)仔數(shù)的影響,本文進行了如下的研究.1.胚胎附植期梅山豬EphrinA1全編碼區(qū)克隆、表達及其生物信息學(xué)分析(目的):為了研究促紅細胞生成素產(chǎn)生肝細胞配體A1(EphrinA1)對梅山豬胚胎附植期胚胎和子宮內(nèi)膜間遷移和粘附活動的影響。(方法):本文以梅山豬胚胎附植期子宮內(nèi)膜附植點為試驗對象,利用克隆測序、生物信息學(xué)和qRT-PCR方法,克隆了EphrinA1基因的全長編碼序列,對其蛋白結(jié)構(gòu)和功能等進行了預(yù)測,還檢測了其mRNA表達變化。(結(jié)果):結(jié)果表明,梅山豬EphrinA1基因編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)5個cSNPs變異,在外顯子1上有兩個突變分別是G89A、G91C,在外顯子2上也有兩個突變分別是T101C、A208G,在外顯子4上發(fā)生了一個突變是G526A,其中2個導(dǎo)致氨基酸突變,分別為Glu29Asn和Trp33Arg,位于EphrinA1外顯子1和外顯子2上。在EphrinA1編碼序列中含有5個外顯子,一共編碼了 205個氨基酸,從這205個氨基酸的理化性質(zhì)分析可得到EphrinA1為不穩(wěn)定的親水性蛋白,有1個信號肽和一個保守區(qū)域,無跨膜區(qū)。由此可以推斷出,這些特性有可能是Glu29Asn,Trp33Arg突變引起一些蛋白的特異性結(jié)合,從而會影響到EphrinJ1基因功能。另外,EphrinA1在梅山豬胚胎附植期有較強的mRNA表達,EphrinA1在胚胎附植期(第13-24天)的mRNA表達趨勢為先升高后降低,即在胚胎附植早期至中期的過程中表達量持續(xù)升高,在胚胎附植中期至晚期的過程中表達量持續(xù)降低。且妊娠第18天的表達量極顯著高于其它妊娠日齡(P0.05),這些表達量EphrinA1的mRNA表達在梅山豬胚胎附植調(diào)控中可能發(fā)揮了一定的作用。EphrinA1的mRNA高表達量是否參與了梅山豬的胚胎附植調(diào)控,還需要在細胞水平上通過基因過量表達和沉默技術(shù)進行分析。(結(jié)論):通過對梅山豬EphrinA1基因全編區(qū)克隆、表達及生物學(xué)分析所得的數(shù)據(jù)顯示這些可能參與梅山豬的胚胎附植調(diào)控,影響了EphrinA1基因的功能,其cSNPs有望成為影響豬產(chǎn)仔數(shù)基因的潛在分子標(biāo)記。2.梅山豬胚胎附植期EphB2的組織表達分析(目的):促紅細胞生成素產(chǎn)生肝細胞受體B2(EphB2)在多種細胞的遷移和侵入活動中發(fā)揮作用。EphB2作為Eph-Ephrin家族中的受體一員,在多種細胞的遷移和粘附活動中發(fā)揮作用,有研究報道EphB2過量表達會使人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的粘附能力降低,并使細胞的侵入能力增加。為了研究EphB2對豬胚胎附植期胚胎和子宮內(nèi)膜間遷移和粘附活動的影響。(方法):本文以太湖流域梅山豬為試驗對象,利用實時熒光定量PCR方法和Western blot方法,分析了該基因在梅山豬胚胎附植前、中、后期子宮內(nèi)膜和卵巢組織的mRNA和蛋白表達譜。(結(jié)果):在豬子宮內(nèi)膜附植點和附植點間,EphB2在胚胎附植期(第13-24天)的mRNA表達趨勢基本保持一致,都是先升高后降低,且妊娠第18天的表達量極顯著高于其它妊娠日齡(P0.01),在卵巢中,EphB2在胚胎附植期的mRNA表達趨勢為先降低后升高,且妊娠第18天的表達量顯著低于其它妊娠日齡(P0.01)。這與子宮內(nèi)膜中的表達趨勢相反。另外,同一胚胎附植時期(妊娠第18天),子宮內(nèi)膜附植點的表達量極顯著高于子宮內(nèi)膜附植點間和卵巢組織(P0.01)。EphB2在子宮內(nèi)膜附植點和附植點間的蛋白表達曲線均呈先升高后降低的趨勢,即在胚胎附植早期至中期的過程中表達量持續(xù)升高,在胚胎附植中期至晚期的過程中表達量持續(xù)降低。由此得出EphB2在胚胎附植期豬子宮內(nèi)膜的mRNA和蛋白均呈現(xiàn)先升高后降低的表達趨勢,且附植中期的表達量顯著高于前期和后期(P0.01);而EphB2在卵巢中的表達趨勢則相反,為先降低后升高。(結(jié)論):EphB2很可能在豬胚胎附植過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用,可成為潛在的豬產(chǎn)仔數(shù)性狀候選基因。綜上所述,Ephrin41和EphB2基因在梅山豬的胚胎附植期都有著比較高的表達量,可能對豬的胚胎附植發(fā)揮著一定的調(diào)控作用,可成為豬產(chǎn)仔數(shù)性狀候選基因。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S828

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本文編號：2398234