【摘要】：為研究鼠傷寒沙門(mén)菌鞭毛蛋白FliC的生物學(xué)特性,利用PCR方法擴(kuò)增鼠傷寒沙門(mén)菌鞭毛蛋白FliC基因,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-32a-FliC,經(jīng)大腸桿菌Rosetta(DE3)表達(dá)、鎳離子親和層析法純化后用SDS-PAGE和Western-blot方法分析。重組蛋白與巨噬細(xì)胞RAW264.7共孵育,ELISA和CCK-8法分別檢測(cè)巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子和巨噬細(xì)胞增殖情況。重組蛋白免疫小鼠后不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)血清抗體效價(jià)和細(xì)胞因子水平。結(jié)果顯示,鼠傷寒沙門(mén)菌鞭毛蛋白FliC在大腸桿菌中呈可溶性表達(dá),且可獲得純度較高的重組鞭毛蛋白。50 ng/m L和500 ng/m L重組鞭毛蛋白可刺激巨噬細(xì)胞增殖,同時(shí)促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IFN-γ和TNF-α。重組蛋白免疫小鼠后效價(jià)在第3周達(dá)到1∶128 000,同時(shí)小鼠血清細(xì)胞因子的分泌量呈倒V型變化。研究結(jié)果為后續(xù)進(jìn)一步研究FliC蛋白在細(xì)菌感染、侵襲和免疫方面的作用研究提供了參考數(shù)據(jù)。
[Abstract]:In order to study the biological characteristics of flagellin FliC of Salmonella typhimurium, the FliC gene of flagellin of Salmonella typhimurium was amplified by PCR, and the recombinant expression plasmid p ET-32a-FliC, was constructed and expressed by Rosetta (DE3). Nickel ion affinity chromatography was used to purify and analyze by SDS-PAGE and Western-blot. The recombinant protein was co-incubated with macrophage RAW264.7. Macrophage cytokines and macrophage proliferation were detected by ELISA and CCK-8. Serum antibody titers and cytokines levels were measured at different time points after immunization with recombinant protein. The results showed that the flagellin FliC of Salmonella typhimurium was soluble expressed in Escherichia coli, and the purified recombinant flagellin could be obtained. 50 ng/m L and 500 ng/m L of recombinant flagellin could stimulate the proliferation of macrophages. At the same time, the macrophages secreted IL-1,IL-4,IL-6,IL-8,IFN- 緯 and TNF- 偽. The titer of recombinant protein reached 1: 128 000 in the third week after immunization, and the secretion of cytokines in serum of mice showed reverse V type change. The results provide reference data for further study on the role of FliC protein in bacterial infection, invasion and immunity.
【作者單位】： 河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院/洛陽(yáng)市活載體生物材料與動(dòng)物疫病防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院;洛陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31302059、31572489) 河南省科技攻關(guān)項(xiàng)目(152102110078) 河南科技大學(xué)博士啟動(dòng)基金項(xiàng)目(13480071);河南科技大學(xué)青年科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2015QN033);河南科技大學(xué)省部級(jí)科技創(chuàng)新平臺(tái)培育項(xiàng)目(2015SPT004)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.61

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本文編號(hào)：2397022