【摘要】：為研究鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白FliC的生物學特性,利用PCR方法擴增鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白FliC基因,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒p ET-32a-FliC,經(jīng)大腸桿菌Rosetta(DE3)表達、鎳離子親和層析法純化后用SDS-PAGE和Western-blot方法分析。重組蛋白與巨噬細胞RAW264.7共孵育,ELISA和CCK-8法分別檢測巨噬細胞細胞因子和巨噬細胞增殖情況。重組蛋白免疫小鼠后不同時間點檢測血清抗體效價和細胞因子水平。結(jié)果顯示,鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白FliC在大腸桿菌中呈可溶性表達,且可獲得純度較高的重組鞭毛蛋白。50 ng/m L和500 ng/m L重組鞭毛蛋白可刺激巨噬細胞增殖,同時促進巨噬細胞分泌IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IFN-γ和TNF-α。重組蛋白免疫小鼠后效價在第3周達到1∶128 000,同時小鼠血清細胞因子的分泌量呈倒V型變化。研究結(jié)果為后續(xù)進一步研究FliC蛋白在細菌感染、侵襲和免疫方面的作用研究提供了參考數(shù)據(jù)。
[Abstract]:In order to study the biological characteristics of flagellin FliC of Salmonella typhimurium, the FliC gene of flagellin of Salmonella typhimurium was amplified by PCR, and the recombinant expression plasmid p ET-32a-FliC, was constructed and expressed by Rosetta (DE3). Nickel ion affinity chromatography was used to purify and analyze by SDS-PAGE and Western-blot. The recombinant protein was co-incubated with macrophage RAW264.7. Macrophage cytokines and macrophage proliferation were detected by ELISA and CCK-8. Serum antibody titers and cytokines levels were measured at different time points after immunization with recombinant protein. The results showed that the flagellin FliC of Salmonella typhimurium was soluble expressed in Escherichia coli, and the purified recombinant flagellin could be obtained. 50 ng/m L and 500 ng/m L of recombinant flagellin could stimulate the proliferation of macrophages. At the same time, the macrophages secreted IL-1,IL-4,IL-6,IL-8,IFN- 緯 and TNF- 偽. The titer of recombinant protein reached 1: 128 000 in the third week after immunization, and the secretion of cytokines in serum of mice showed reverse V type change. The results provide reference data for further study on the role of FliC protein in bacterial infection, invasion and immunity.
【作者單位】： 河南科技大學動物科技學院/洛陽市活載體生物材料與動物疫病防控重點實驗室;河南科技大學醫(yī)學院;洛陽職業(yè)技術(shù)學院;
【基金】：國家自然科學基金項目(31302059、31572489) 河南省科技攻關(guān)項目(152102110078) 河南科技大學博士啟動基金項目(13480071);河南科技大學青年科學基金資助項目(2015QN033);河南科技大學省部級科技創(chuàng)新平臺培育項目(2015SPT004)
【分類號】：S852.61

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本文編號：2397022