【摘要】：旨在克隆表達(dá)豬丹毒絲菌SpaA蛋白,分析其免疫原性,為豬丹毒新型疫苗的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。運(yùn)用PCR擴(kuò)增SpaA基因,連接至pGEX-6P-1載體,將陽性重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDSPAGE分析表達(dá)產(chǎn)物,GST親和層析純化融合蛋白質(zhì),Western blot鑒定;純化SpaA蛋白免疫小鼠,間接ELISA檢測血清中IgG和Th1、Th2相關(guān)細(xì)胞因子;不同致病力豬丹毒絲菌攻擊免疫小鼠,觀察病理組織變化及其免疫保護(hù)率。結(jié)果顯示,豬丹毒絲菌SpaA基因在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)表達(dá),獲得大小為75ku的純化目的蛋白質(zhì)。該蛋白質(zhì)能特異性識(shí)別豬丹毒絲菌抗血清,可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較高水平的特異性抗體IgG,并使TNF-β、IFN-γ、IL-5、IL-10含量顯著升高,對(duì)攻毒菌的免疫保護(hù)率均為100%,病理組織變化與攻毒對(duì)照組之間差異明顯�？梢姵晒Λ@得的重組SpaA蛋白具有良好的免疫原性,能激發(fā)機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫,產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫保護(hù)力,可以作為研發(fā)豬丹毒亞單位疫苗的候選抗原。
[Abstract]:The aim of this study was to clone and express the SpaA protein of porcine erysipelas and analyze its immunogenicity so as to lay a foundation for the research and development of a new vaccine of porcine erysipelas. The SpaA gene was amplified by PCR and ligated to the pGEX-6P-1 vector. The positive recombinant plasmid was transformed into E. coli Rosetta (DE3), IPTG induced expression, SDSPAGE analysis, GST affinity chromatography). The fusion protein, Western blot was purified by GST affinity chromatography. The mice were immunized with purified SpaA protein, the serum IgG and Th1,Th2 related cytokines were detected by indirect ELISA, the mice were immunized with different pathogenicity swine erysipelas, and the pathological changes and the immune protective rate were observed. The results showed that the SpaA gene of erysipelas porcine was expressed in Escherichia coli and purified protein with the size of 75ku was obtained. The protein can specifically recognize the antiserum of Rhizoma erysipelas, induce the production of high level of specific antibody IgG, and increase the contents of TNF- 尾, IFN- 緯 and IL-5,IL-10 in mice. There was a significant difference between the pathological changes and the control group. It can be seen that the recombinant SpaA protein obtained successfully has good immunogenicity, can stimulate humoral and cellular immunity and produce strong immune protection, and can be used as a candidate antigen for the development of porcine erysipelas subunit vaccine.
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;安徽省畜禽產(chǎn)業(yè)共性技術(shù)研究院;
【基金】：國家星火計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(2014GA710002) 安徽省質(zhì)量工程項(xiàng)目(2013sxzx008) 安徽省生豬產(chǎn)業(yè)體系基金
【分類號(hào)】：S852.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2394915