發(fā)布時間：2018-12-27 17:40

【摘要】：為探討玉米赤霉烯酮(ZEA)的雄性生殖毒性及其機(jī)理,本試驗研究了低質(zhì)量濃度ZEA暴露對小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞株TM3細(xì)胞增殖及核內(nèi)γH2AX熒光焦點產(chǎn)生的影響。以TM3細(xì)胞為材料,加入不同質(zhì)量濃度的ZEA,設(shè)0,5,10,20μg/L ZEA染毒組,培養(yǎng)72h后,應(yīng)用噻唑藍(lán)比色法檢測TM3細(xì)胞增殖活力,觀察細(xì)胞周期分布及其調(diào)控蛋白Cyclin D1、CDK4表達(dá)情況,同時應(yīng)用免疫熒光、蛋白免疫印跡法檢測TM3細(xì)胞中γH2AX含量的變化。結(jié)果顯示,染毒72h后,低質(zhì)量濃度的ZEA對TM3細(xì)胞的生長具有明顯的促進(jìn)作用,檢測細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)10μg/L ZEA染毒組G1/G0期細(xì)胞分布百分比顯著下降(P0.05),S期細(xì)胞分布百分比顯著升高(P0.05),20μg/L ZEA染毒組G1/G0期細(xì)胞分布百分比極顯著下降(P0.01),S期細(xì)胞分布百分比顯著升高(P0.05);通過免疫熒光發(fā)現(xiàn),5μg/L ZEA染毒組中部分細(xì)胞開始出現(xiàn)1至2個熒光焦點,與對照組相比,10μg/L ZEA染毒組和20μg/L ZEA染毒組出現(xiàn)γH2AX熒光焦點的細(xì)胞數(shù)量明顯增多,熒光焦點數(shù)呈極顯著升高(P0.01);同時通過蛋白免疫印跡法發(fā)現(xiàn),ZEA能夠促進(jìn)γH2AX蛋白表達(dá)量的增加,對細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白Cyclin D1、CDK4的表達(dá)也有明顯的促進(jìn)作用。低質(zhì)量濃度的ZEA有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用,并可誘發(fā)TM3細(xì)胞的DNA雙鏈斷裂,呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。
[Abstract]:In order to study the male reproductive toxicity and mechanism of zeatin scinalenone (ZEA), the effects of low concentration ZEA exposure on the proliferation of TM3 cells and the production of 緯 H2AX fluorescence focus in nucleus of mouse testis stromal cell line were studied. TM3 cells were used as materials and ZEA, of different concentration was added to the control group. After 72 hours of culture, the proliferative activity of TM3 cells was detected by thiazolyl blue colorimetry, and the cell cycle distribution and the expression of Cyclin D1 + CDK4 were observed. At the same time, immunofluorescence and Western blot were used to detect the change of 緯 H2AX content in TM3 cells. The results showed that low concentration of ZEA significantly promoted the growth of TM3 cells 72 h after exposure, and the percentage of cell distribution in G1/G0 phase of 10 渭 g / L ZEA group decreased significantly (P0.05). The percentage of cell distribution in S phase was significantly increased (P0.05), and in 20 渭 g / L ZEA group, the percentage of cell distribution in G1/G0 phase was significantly decreased (P0.01), S phase cell distribution percentage was significantly increased (P0.05); It was found by immunofluorescence that some cells in 5 渭 g / L ZEA group began to present 1 or 2 fluorescent focal points. Compared with the control group, the number of cells exposed to 10 渭 g / L ZEA and 20 渭 g / L ZEA was significantly higher than that of the control group, and the number of cells exposed to 10 渭 g / L ZEA and 20 渭 g / L ZEA was significantly higher than that of the control group. The number of fluorescence focal points increased significantly (P0.01). At the same time, it was found by Western blotting that ZEA could promote the expression of 緯 H2AX protein and the expression of Cyclin D1 / CDK4, which was related to cell cycle regulation. Low concentration of ZEA could promote cell proliferation and induce DNA double strand breaks in TM3 cells in a dose-effect manner.
【作者單位】： 揚州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項目(PAPD) 江蘇省普通高校自然科學(xué)基金資助項目(08KJD230002)
【分類號】：S859.8

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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4 趙靜s，

本文編號：2393393