【摘要】：利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增三源重組H1N1亞型豬流感病毒A/Swine/Tianjin/10/2013(H1N1)的8個(gè)基因片段,分別克隆至雙向轉(zhuǎn)錄/表達(dá)載體p BD上。將8個(gè)重組質(zhì)粒純化后共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,收取轉(zhuǎn)染48 h后的細(xì)胞上清并接種MDCK細(xì)胞,成功拯救出有血凝活性的病毒。全基因序列測(cè)定結(jié)果表明,拯救病毒與野生病毒的核苷酸序列完全一致。生長(zhǎng)曲線的測(cè)定結(jié)果表明,不同時(shí)間點(diǎn)野生毒株與拯救毒株在MDCK細(xì)胞上的病毒滴度沒(méi)有明顯差異。三源重組H1N1亞型豬流感病毒反向遺傳操作平臺(tái)的成功建立為進(jìn)一步開(kāi)展豬流感病毒的生物學(xué)特性研究奠定了基礎(chǔ),同時(shí)也為H1N1亞型豬流感疫苗的研制開(kāi)辟了新的途徑。
[Abstract]:Eight gene fragments of recombinant H1N1 subtype A/Swine/Tianjin/10/2013 (H1N1) were amplified by RT-PCR and cloned into bidirectional transcriptional / expression vector p BD. Eight recombinant plasmids were purified and cotransfected into 293T cells. The supernatants were collected and inoculated into MDCK cells after 48 hours of transfection. The virus with hemagglutination activity was successfully saved. The results of whole gene sequencing showed that the nucleotide sequence of rescue virus and wild virus were identical. The results of growth curve showed that there was no significant difference in the titers of wild and rescue strains in MDCK cells at different time points. The successful establishment of the reverse genetic operation platform for the recombinant H1N1 subtype swine influenza virus laid a foundation for further research on the biological characteristics of swine influenza virus and opened a new way for the development of H1N1 subtype swine flu vaccine.
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;
【基金】：上海市自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(16ZR1444000) 中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(2015JB07) 閔行領(lǐng)軍人才隊(duì)伍建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)資金 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院創(chuàng)新工程“豬病毒性繁殖障礙綜合癥團(tuán)隊(duì)”項(xiàng)目
【分類(lèi)號(hào)】：S852.651

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2392787