【摘要】：利用RT-PCR技術擴增三源重組H1N1亞型豬流感病毒A/Swine/Tianjin/10/2013(H1N1)的8個基因片段,分別克隆至雙向轉錄/表達載體p BD上。將8個重組質粒純化后共轉染293T細胞,收取轉染48 h后的細胞上清并接種MDCK細胞,成功拯救出有血凝活性的病毒。全基因序列測定結果表明,拯救病毒與野生病毒的核苷酸序列完全一致。生長曲線的測定結果表明,不同時間點野生毒株與拯救毒株在MDCK細胞上的病毒滴度沒有明顯差異。三源重組H1N1亞型豬流感病毒反向遺傳操作平臺的成功建立為進一步開展豬流感病毒的生物學特性研究奠定了基礎,同時也為H1N1亞型豬流感疫苗的研制開辟了新的途徑。
[Abstract]:Eight gene fragments of recombinant H1N1 subtype A/Swine/Tianjin/10/2013 (H1N1) were amplified by RT-PCR and cloned into bidirectional transcriptional / expression vector p BD. Eight recombinant plasmids were purified and cotransfected into 293T cells. The supernatants were collected and inoculated into MDCK cells after 48 hours of transfection. The virus with hemagglutination activity was successfully saved. The results of whole gene sequencing showed that the nucleotide sequence of rescue virus and wild virus were identical. The results of growth curve showed that there was no significant difference in the titers of wild and rescue strains in MDCK cells at different time points. The successful establishment of the reverse genetic operation platform for the recombinant H1N1 subtype swine influenza virus laid a foundation for further research on the biological characteristics of swine influenza virus and opened a new way for the development of H1N1 subtype swine flu vaccine.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所;
【基金】：上海市自然科學基金青年項目(16ZR1444000) 中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務費項目(2015JB07) 閔行領軍人才隊伍建設專項資金 中國農(nóng)業(yè)科學院創(chuàng)新工程“豬病毒性繁殖障礙綜合癥團隊”項目
【分類號】：S852.651

【參考文獻】

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