【摘要】：將分離的H3N2亞型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)A/Canine/Nanjing/11/2012(H3N2)株的核蛋白(NP)基因克隆至原核表達(dá)載體p ET28a(+)中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-NP,然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coli Rosetta(DE)感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,采用SDS-PAGE和Western blot進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,大腸桿菌表達(dá)的重組NP蛋白的分子量約為61 k Da,與預(yù)期相符,并能與犬CIV陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)。將表達(dá)的重組NP蛋白進(jìn)行純化后,免疫大白兔制備抗NP蛋白多克隆抗體血清,Western blot檢測該血清可與CIV的NP蛋白發(fā)生特異性反應(yīng),間接ELISA檢測該多克隆抗體血清的效價(jià)達(dá)1:30 000,顯示了較高的抗體效價(jià)。本研究為CIV快速檢測方法的建立和流行病學(xué)調(diào)查奠定了科學(xué)依據(jù)。
[Abstract]:The nucleoprotein (NP) gene of H3N2 subtype (Canine influenza virus,CIV A/Canine/Nanjing/11/2012 (H3N2) strain was cloned into prokaryotic expression vector p ET28a (), and the recombinant expression plasmid p ET-NP, was constructed. Then the cells were transformed into Escherichia coli E.coli Rosetta (DE) competent cells and induced by IPTG. The results were analyzed by SDS-PAGE and Western blot. The results showed that the molecular weight of the recombinant NP protein expressed by Escherichia coli was about 61k Da, which was consistent with the expectation, and could react specifically with the canine CIV positive serum. After purification of the expressed recombinant NP protein, the polyclonal antibody against NP protein was prepared from immunized white rabbits to detect the specific reaction between the serum, Western blot and the NP protein of CIV. The titer of the polyclonal antibody was 1:30 000 by indirect ELISA, which showed a high titer of the polyclonal antibody. This study provides a scientific basis for the establishment of rapid detection of CIV and epidemiological investigation.
【作者單位】： 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所
【基金】：江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項(xiàng)目(CX(15)1065)
【分類號】：S852.655

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