【摘要】：為建立水泡性口炎病毒印第安納型(VSV-IND)和新澤西型(VSV-NJ)的快速鑒別檢測方法,本研究根據(jù)水泡性口炎病毒2種血清型相對保守的L基因為靶序列,分別設(shè)計2對型特異性引物和2條不同熒光基團修飾的探針。經(jīng)過對反應(yīng)體系的優(yōu)化,建立了能夠同時檢測VSV-IND和VSV-NJ的雙重?zé)晒釸TPCR方法。該方法能準(zhǔn)確鑒別VSV兩種血清型,與口蹄疫病毒(FMDV)、藍(lán)舌病病毒(BTV)、牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)、豬水泡病病毒(SVDV)、豬瘟病毒(CSFV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)等滅活抗原核酸無非特異性擴增,特異性強。與普通RT-PCR相比,反應(yīng)快速、靈敏度高。Ct值的變異系數(shù)小于3%,重復(fù)性好。利用所建立方法對126份臨床樣品進行檢測,結(jié)果與普通RT-PCR相同。上述結(jié)果表明,本研究建立的方法為VSV-IND和VSV-NJ的同時鑒別檢測提供了一種快速、特異和敏感的方法。
[Abstract]:In order to establish a rapid method for the identification and detection of vesicular stomatitis virus (VSV-IND) and New Jersey virus (VSV-NJ), two serotypes of vesicular stomatitis virus (BMDV) were selected as target sequences. Two pairs of type specific primers and two probes modified by different fluorescent groups were designed. After optimizing the reaction system, a double fluorescence RTPCR method was established for simultaneous detection of VSV-IND and VSV-NJ. This method can be used to identify the two serotypes of VSV accurately, which can be compared with (FMDV), blue tongue disease virus, (BTV), bovine viral diarrhea virus, (BVDV), virus, porcine vesicular disease virus, (SVDV), swine fever virus (CSFV),. Inactivated antigen nucleic acids such as porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) were amplified with high specificity. Compared with ordinary RT-PCR, the reaction was rapid, the sensitivity was high, the coefficient of variation of Ct value was less than 3 and the repeatability was good. The established method was used to detect 126 clinical samples and the result was the same as that of common RT-PCR. The results showed that the method established in this study provides a rapid, specific and sensitive method for simultaneous identification and detection of VSV-IND and VSV-NJ.
【作者單位】： 深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術(shù)中心;
【基金】：國家科技支撐計劃項目(2013BAD12B03) “十三五”國家重點研發(fā)計劃課題項目(2016YFC1200904)
【分類號】：S852.65

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