【摘要】：為制備抗頭孢氨芐(cephalexin,CEX)的單克隆抗體并建立鮮奶中CEX殘留檢測的ELISA方法,本試驗(yàn)采用戊二醛兩步法分別將CEX與牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián),用合成的CEX-BSA作為免疫原免疫BALB/c雌鼠;5次免疫后,應(yīng)用雜交瘤細(xì)胞融合技術(shù)建立并篩選出兩株(2G4、5B3)分泌抗CEX單克隆抗體(monoclonal antibodies,McAb)的雜交瘤細(xì)胞株,將2G4細(xì)胞株注入BALB/c小鼠腹腔制備腹水,并對(duì)腹水進(jìn)行純化及鑒定。結(jié)果顯示,2G4腹水效價(jià)大于1∶1.28×10~5,其抗體亞型為IgG2b(κ),親和力常數(shù)K=1.51×10~9 L/mol;交叉試驗(yàn)結(jié)果顯示,該單克隆抗體除了與頭孢拉定有52.55%的交叉反應(yīng)率外,與頭孢噻呋、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢噻吩、青霉素、鏈霉素、四環(huán)素均無明顯交叉反應(yīng);建立了測定鮮奶樣品中CEX的ELISA方法,線性范圍為20~1 000ng/mL,線性方程y=0.4674x-0.5359(R~2=0.9909),檢測下限為19.68ng/mL,平均回收率為91.31%,平均變異系數(shù)低于15%,低于中國及歐盟規(guī)定的頭孢氨芐最高殘留限量,具有一定的應(yīng)用前景。
[Abstract]:In order to prepare monoclonal antibodies against cefalexin (cephalexin,CEX) and to establish a ELISA method for the detection of CEX residues in fresh milk, CEX was coupled with bovine serum albumin (BSA) (BSA), ovalbumin (OVA) by glutaraldehyde two-step method. BALB/c female mice were immunized with synthetic CEX-BSA. After five times of immunization, two hybridoma cell lines (2G4O5B3) secreting monoclonal antibody to CEX (monoclonal antibodies,McAb) were established and screened by hybridoma cell fusion technique. The 2G4 cell lines were injected into the abdominal cavity of BALB/c mice to prepare ascites. The ascites were purified and identified. The results showed that the titer of 2G4 ascites was more than 1: 1.28 脳 10 ~ (5), the antibody subtype was IgG2b (魏), and the affinity constant was 1.51 脳 10 ~ (9) L / mol. The results of cross test showed that the monoclonal antibody had no significant cross reaction with cefotaxime, cefotriaxone, cefotaxime, cefothiophene, penicillin, streptomycin and tetracycline except for the cross reaction rate of 52.55% with cefradine. A ELISA method for the determination of CEX in fresh milk samples was established. The linear range was 20ng / mL, the linear equation y=0.4674x-0.5359 (Ru 20.9909), the detection limit was 19.68 ng / mL, the average recovery was 91.31, and the average coefficient of variation was lower than 15%. It is lower than the maximum residue limit of Cefalexin stipulated by China and European Union, and has a certain application prospect.
【作者單位】： 揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;張浦鎮(zhèn)動(dòng)物防疫站;
【基金】：江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程 江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心 江蘇省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題
【分類號(hào)】：S859.84

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本文編號(hào)：2377606