【摘要】：為建立快速檢測兔出血癥病毒(RHDV)的TaqMan熒光定量PCR方法,根據(jù)RHDV VP60基因保守序列設(shè)計1對特異性引物和1條探針,進行條件優(yōu)化,檢測重復(fù)性、敏感性和特異性,建立了RHDV TaqMan熒光定量PCR方法。結(jié)果顯示,標準品濃度在2.8×10~6~2.8×10~2 copies/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,最低可檢測到2.8×10~1copies/L的標準品陽性質(zhì)粒,變異系數(shù)小于2%。結(jié)果表明,建立的TaqMan熒光定量PCR方法的特異性、敏感性、重復(fù)性均達到試驗設(shè)計要求,能快速檢測臨床樣品中的RHDV,為我國RHDV的檢測及其定量檢測的相關(guān)研究提供了一種可靠的技術(shù)工具。
[Abstract]:In order to establish a TaqMan fluorescence quantitative PCR method for rapid detection of rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV), a pair of specific primers and a probe were designed according to the conserved sequence of RHDV VP60 gene. The conditions were optimized to detect reproducibility, sensitivity and specificity. RHDV TaqMan fluorescence quantitative PCR method was established. The results showed that there was a good linear relationship in the range of 2.8 脳 10 ~ (6) ~ (2) 脳 10 ~ (2) copies/L for the standard sample concentration. The lowest positive plasmid of 2.8 脳 10~1copies/L could be detected, and the coefficient of variation was less than 2 ~ (th). The results showed that the specificity, sensitivity and repeatability of the established TaqMan fluorescence quantitative PCR method were up to the requirements of the experimental design, and could be used for rapid detection of RHDV, in clinical samples. It provides a reliable technical tool for the detection and quantitative detection of RHDV in China.
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;四川省動物疫病預(yù)防控制中心;動物疫病與人類健康四川省重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31402222) “十二五”國家科技支撐計劃項目(2013BAD12B04) 四川省科技支撐計劃項目(2016N20002)
【分類號】：S852.65

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本文編號：2365349