【摘要】：研究背景禽白血病病毒是禽類(lèi)的致癌性逆轉(zhuǎn)錄病毒,能夠引起臨床腫瘤,目前沒(méi)有有效藥物治療和預(yù)防。國(guó)內(nèi)外研發(fā)的抗病毒藥物雖然多,但是其毒副作用大,病毒易產(chǎn)生耐藥性,而且抗病毒的種類(lèi)也有限。與西藥相比,中藥具有耐藥性低,毒副作用小等優(yōu)點(diǎn),還可以抑制病毒復(fù)制和調(diào)節(jié)免疫功能等特點(diǎn)。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,銀杏外種皮多糖和黃芩苷具有廣譜的抗病毒作用,黃芩苷可以抑制屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒的HIV病毒的復(fù)制。基于之前的報(bào)道本研究首選這兩種中藥作為抗禽白血病毒的研究。研究目的本研究是在前人研究中藥抗病毒活性的基礎(chǔ)上,主要利用體外細(xì)胞培養(yǎng)法,研究?jī)煞N常見(jiàn)抗病毒中藥,銀杏外種皮多糖和黃芩苷對(duì)J亞群禽白血病病毒在DF-1細(xì)胞中復(fù)制與增殖的影響,并進(jìn)一步探討中藥調(diào)節(jié)細(xì)胞抗病毒的具體機(jī)制。研究方法1、采用細(xì)胞毒性檢測(cè)方法對(duì)銀杏外種皮多糖和黃芩苷在DF-1細(xì)胞上的細(xì)胞毒性進(jìn)行測(cè)定。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法初步鑒定這兩種藥物的抗病毒作用。2、體外實(shí)驗(yàn)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western blot、TCID50方法,在感染ALV-J病毒的DF-1細(xì)胞中研究銀杏外種皮多糖和黃芩苷抗病毒作用及其機(jī)制。3、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用感染ALV-J病毒130日齡家禽作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,分離外周血淋巴細(xì)胞,體外進(jìn)行黃芩苷藥物作用,16h后通過(guò)流式細(xì)胞儀分析不同濃度黃芩苷誘導(dǎo)感染ALV-J淋巴細(xì)胞的凋亡比例,初步鑒定黃芩苷促病毒感染細(xì)胞的凋亡作用。研究結(jié)果1、測(cè)定銀杏外種皮多糖在DF-1細(xì)胞中當(dāng)藥物濃度在200μg/mL時(shí)仍然沒(méi)有細(xì)胞毒性,黃芩苷無(wú)細(xì)胞毒性劑量為20μg/mL。熒光定量PCR結(jié)果初步鑒定銀杏外種皮多糖和黃芩苷可以顯著下調(diào)ALV-J病毒gp37基因在DF-1細(xì)胞中的表達(dá)。2、分別在基因和蛋白水平以及病毒增殖實(shí)驗(yàn)中證明銀杏外種皮多糖可以有效抑制ALV-J的復(fù)制作用。銀杏外種皮多糖有效抑制ALV-J病毒復(fù)制作用,主要在預(yù)處理階段發(fā)揮抑制病毒的功效。同時(shí)銀杏外種皮多糖還顯著下調(diào)細(xì)胞ISG12-2、TNF-α和IL-1β的表達(dá)。這種現(xiàn)象是否與銀杏外種皮多糖抑制病毒復(fù)制作用直接相關(guān),還有待進(jìn)一步研究。3、分別在基因和蛋白水平以及病毒增殖實(shí)驗(yàn)中證明黃芩苷可以有效抑制ALV-J的復(fù)制作用,并呈現(xiàn)出劑量和時(shí)間依賴(lài)性。黃芩苷促使細(xì)胞ISG12-2、TNF-α和IL-1β的表達(dá)顯著下調(diào),這種現(xiàn)象是否與黃芩苷抑制病毒復(fù)制作用直接相關(guān),還有待進(jìn)一步研究。初步證明黃芩苷可以誘導(dǎo)體外分離培養(yǎng)的ALV-J病毒感染的動(dòng)物外周血淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡,并且凋亡比例呈現(xiàn)藥物劑量依賴(lài)性。結(jié)論銀杏外種皮多糖和黃芩苷在體外DF-1細(xì)胞中均具有明顯的抗J亞群禽白血病病毒復(fù)制作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)藥物對(duì)病毒復(fù)制影響的同時(shí)還下調(diào)病毒感染細(xì)胞中ISG12-2、IL-1β、TNF-α細(xì)胞因子表達(dá),那么細(xì)胞因子的下調(diào)是否與抗病毒作用具有直接關(guān)聯(lián),還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明。此外,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明黃芩苷可以誘導(dǎo)ALV-J病毒感染的外周血淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡,其具體的促凋亡機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S853.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2357102