【摘要】：研究背景禽白血病病毒是禽類的致癌性逆轉(zhuǎn)錄病毒,能夠引起臨床腫瘤,目前沒有有效藥物治療和預(yù)防。國內(nèi)外研發(fā)的抗病毒藥物雖然多,但是其毒副作用大,病毒易產(chǎn)生耐藥性,而且抗病毒的種類也有限。與西藥相比,中藥具有耐藥性低,毒副作用小等優(yōu)點,還可以抑制病毒復(fù)制和調(diào)節(jié)免疫功能等特點。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報道,銀杏外種皮多糖和黃芩苷具有廣譜的抗病毒作用,黃芩苷可以抑制屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒的HIV病毒的復(fù)制�；谥暗膱蟮辣狙芯渴走x這兩種中藥作為抗禽白血病毒的研究。研究目的本研究是在前人研究中藥抗病毒活性的基礎(chǔ)上,主要利用體外細(xì)胞培養(yǎng)法,研究兩種常見抗病毒中藥,銀杏外種皮多糖和黃芩苷對J亞群禽白血病病毒在DF-1細(xì)胞中復(fù)制與增殖的影響,并進(jìn)一步探討中藥調(diào)節(jié)細(xì)胞抗病毒的具體機(jī)制。研究方法1、采用細(xì)胞毒性檢測方法對銀杏外種皮多糖和黃芩苷在DF-1細(xì)胞上的細(xì)胞毒性進(jìn)行測定。利用實時熒光定量PCR方法初步鑒定這兩種藥物的抗病毒作用。2、體外實驗采用實時熒光定量PCR、Western blot、TCID50方法,在感染ALV-J病毒的DF-1細(xì)胞中研究銀杏外種皮多糖和黃芩苷抗病毒作用及其機(jī)制。3、體內(nèi)實驗采用感染ALV-J病毒130日齡家禽作為實驗動物模型,分離外周血淋巴細(xì)胞,體外進(jìn)行黃芩苷藥物作用,16h后通過流式細(xì)胞儀分析不同濃度黃芩苷誘導(dǎo)感染ALV-J淋巴細(xì)胞的凋亡比例,初步鑒定黃芩苷促病毒感染細(xì)胞的凋亡作用。研究結(jié)果1、測定銀杏外種皮多糖在DF-1細(xì)胞中當(dāng)藥物濃度在200μg/mL時仍然沒有細(xì)胞毒性,黃芩苷無細(xì)胞毒性劑量為20μg/mL。熒光定量PCR結(jié)果初步鑒定銀杏外種皮多糖和黃芩苷可以顯著下調(diào)ALV-J病毒gp37基因在DF-1細(xì)胞中的表達(dá)。2、分別在基因和蛋白水平以及病毒增殖實驗中證明銀杏外種皮多糖可以有效抑制ALV-J的復(fù)制作用。銀杏外種皮多糖有效抑制ALV-J病毒復(fù)制作用,主要在預(yù)處理階段發(fā)揮抑制病毒的功效。同時銀杏外種皮多糖還顯著下調(diào)細(xì)胞ISG12-2、TNF-α和IL-1β的表達(dá)。這種現(xiàn)象是否與銀杏外種皮多糖抑制病毒復(fù)制作用直接相關(guān),還有待進(jìn)一步研究。3、分別在基因和蛋白水平以及病毒增殖實驗中證明黃芩苷可以有效抑制ALV-J的復(fù)制作用,并呈現(xiàn)出劑量和時間依賴性。黃芩苷促使細(xì)胞ISG12-2、TNF-α和IL-1β的表達(dá)顯著下調(diào),這種現(xiàn)象是否與黃芩苷抑制病毒復(fù)制作用直接相關(guān),還有待進(jìn)一步研究。初步證明黃芩苷可以誘導(dǎo)體外分離培養(yǎng)的ALV-J病毒感染的動物外周血淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡,并且凋亡比例呈現(xiàn)藥物劑量依賴性。結(jié)論銀杏外種皮多糖和黃芩苷在體外DF-1細(xì)胞中均具有明顯的抗J亞群禽白血病病毒復(fù)制作用。實驗發(fā)現(xiàn)藥物對病毒復(fù)制影響的同時還下調(diào)病毒感染細(xì)胞中ISG12-2、IL-1β、TNF-α細(xì)胞因子表達(dá),那么細(xì)胞因子的下調(diào)是否與抗病毒作用具有直接關(guān)聯(lián),還有待進(jìn)一步實驗證明。此外,實驗結(jié)果表明黃芩苷可以誘導(dǎo)ALV-J病毒感染的外周血淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡,其具體的促凋亡機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S853.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 盧科蓮;喻小蘭;夏紀(jì)毅;張宇驕;毛熙光;;黃芩素對宮頸癌細(xì)胞凋亡的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2015年03期

2 鄒寶仁;;中藥在獸醫(yī)臨床中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];黑龍江科技信息;2014年24期

3 喻小蘭;盧科蓮;夏紀(jì)毅;毛熙光;;Ras、CyclinD1在宮頸癌中的表達(dá)及黃芩素對其表達(dá)的影響[J];繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育;2014年02期

4 張春晶;顧立剛;于海濤;;黃芩苷干預(yù)甲型H1N1流感病毒感染誘導(dǎo)的A549細(xì)胞周期分布及凋亡[J];病毒學(xué)報;2011年02期

5 雷芳;;黃芩苷藥理作用研究進(jìn)展[J];中國藥業(yè);2010年15期

6 童旭輝;董淑英;陶亮;;黃芩素對人子宮頸癌HeLa細(xì)胞生長的抑制作用[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2009年06期

7 吳修華;劉妮;楊麗;沈海容;;黃芩素體內(nèi)抗甲型流感病毒作用的研究[J];廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2009年02期

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10 余建國;;銀杏葉多糖對雛雞腫瘤壞死因子α和γ干擾素產(chǎn)生的影響[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2006年05期

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本文編號：2357102