【摘要】：山羊精液保存技術(shù)可提高優(yōu)秀種公羊的利用效率,加快品種改良步伐,便于精液長(zhǎng)途運(yùn)輸,降低疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)。但目前山羊精液低溫保存和冷凍保存技術(shù)都還不成熟,需要進(jìn)一步研究完善。本研究以安徽白山羊?yàn)閷?duì)象,系統(tǒng)研究了不同因素對(duì)山羊精液低溫及冷凍保存效果,內(nèi)容如下:1、pH對(duì)山羊精液低溫保存的影響。采集的混精均分成5份,分別用pH為6.15、6.25、6.35、6.45以及6.80的稀釋液稀釋,5℃冰箱保存,每?jī)商鞕z測(cè)精液品質(zhì)。結(jié)果:保存2d后,pH6.35組的精子活力顯著高于其他組(P0.05);在保存的第2、6、8、10、12d,pH6.35組的質(zhì)膜完整率及頂體完整率顯著高于其他組(P0.05);用pH6.35的稀釋液進(jìn)行低溫保存精液,在保存4、10、12d時(shí)檢測(cè)前提升緩沖液pH至7.2,活力均顯著高于未提升組(P0.05)。2、緩沖液滲透壓對(duì)山羊精液低溫保存的影響。采集的混精均分成4份,分別使用滲透壓為330m Osm、350mOsm、375mOsm、400mOsm的稀釋液進(jìn)行稀釋,5℃冰箱保存,每?jī)商鞕z測(cè)精液質(zhì)量。結(jié)果:保存8d后,滲透壓為375mOsm組的活力顯著高于其他各組(P0.05)、保存6天后375mOsm組的質(zhì)膜完整率、頂體完整率顯著高于其他各組(P0.05)。3、使用上述優(yōu)化了的低溫保存方法低溫保存后進(jìn)行人工授精,用鮮精、保存3d、6d、9d的精液輸精,結(jié)果低溫保存3d、6d的不返情率大于70%,達(dá)到了輸精的要求,低溫保存9d的不返情率雖然顯著低于第3d(P0.05),但也達(dá)到63.11%。4、通過一系列試驗(yàn),優(yōu)化了山羊凍精保存方案:公羊年齡4~6歲;基礎(chǔ)稀釋液組分為Tris 3.07g/100mL、果糖1.26g/100mL、檸檬酸1.64g/100mL、卵黃濃度為15%;兩步稀釋,稀釋后精子密度為2.4×108個(gè)/mL;降溫平衡時(shí)間4h;甘油濃度為5%,添加甘油后再平衡時(shí)間為30min;距離液氮面上方預(yù)冷高度4cm,預(yù)冷10min;37℃水浴解凍30s。5、膽固醇(cholestero,CHL)替代卵黃(egg york,EY)對(duì)山羊凍精質(zhì)量的影響。采集精液混合后均分成5等份,分別用添加1.0 g/L(C1組)、2.5 g/L(C2.5組)、5.0 g/L(C5組)、10.0g/L(C10組)的CHL或15%的EY(對(duì)照組)的基礎(chǔ)冷凍緩沖液稀釋冷凍。解凍后的精子運(yùn)動(dòng)學(xué)參數(shù)使用精子分析儀(SCAS)檢測(cè),質(zhì)膜完整率通過低滲腫脹試驗(yàn)(hypoosmotic swelling test,HOST)檢測(cè),頂體完整率通過姬姆薩染色來檢測(cè)。結(jié)果顯示:對(duì)照組的凍-融精子活力、頂體完整率、曲線速率(curvvilinear velocity,VCL)、平均路徑速度(velocity of average path,VAP)顯著高于各CHL添加組(P0.05),質(zhì)膜完整率、線性度(linearity,LIN)、前向性(straightness,STR)、擺動(dòng)性(wobble,WOB)、精完整率顯著高于C1組(P0.05)。6、磷脂酰膽堿(phosphatidylcholine,PC)替代EY對(duì)山羊凍精質(zhì)量的影響。采集精液混合后均分成5等份,分別用添加10 g/L(P10)、15 g/L(P15)、20g/L(P20)、25g/L(P25)的PC或15%EY(對(duì)照組)的基礎(chǔ)冷凍緩沖液稀釋冷凍。結(jié)果:P15組凍-融精子的活力及VCL、VAP、LIN、STR、WOB及BCF等運(yùn)動(dòng)參數(shù)與EY組差異不顯著(P0.05);P10、P20及P25組解凍精子活力均顯著低于EY組(P0.05)。7、精子凍-融子頭部側(cè)擺幅度(amplitude of lateral head displacement,ALH)及鞭打頻率(beat-cross frequency,BCF)與C2.5、C5和C10組無顯著差異(P0.05),但質(zhì)膜前后膜上膽固醇和磷脂含量變化。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)山羊鮮精中精子膜磷脂含量為559.5±20.23 nmol/109,膽固醇含量為320.0±16.7 nmol/109;采用基礎(chǔ)稀釋液(不添加卵黃或脂質(zhì))稀釋精液,凍-融后,精子磷脂含量為420.3±18.1 nmol/109,膽固醇含量為130.7±20.8 nmol/109;凍-融后精子磷脂、膽固醇丟失質(zhì)量比約為3.759㑳1。8、PC-CHL聯(lián)合替代EY對(duì)山羊凍精質(zhì)量的影響。根據(jù)前一個(gè)試驗(yàn)研究的結(jié)果設(shè)計(jì)了以下PC-CHL聯(lián)合替代配方:基礎(chǔ)液+19g/LPC+1g/L CHL(P19+C1);基礎(chǔ)液+18g/L PC+2g/L CHL(P18+C2);基礎(chǔ)液+16g/L PC+4g/L CHL(P16+C4);基礎(chǔ)液+14g/LPC+6g/L CHL(P14+C6),對(duì)照組為基礎(chǔ)液+15%EY。結(jié)果:凍-融處理后,P19+C1、P18+C2組的精子活力、VCL、直線運(yùn)動(dòng)速度(velocity of straight-line,VSL)、VAP均與對(duì)照組無顯著差異(P0.05);P16+C4組的精子活力、VCL、VAP均顯著高于對(duì)照組(P0.05);P14+C6組的精子活力顯著低于對(duì)照組(P0.05);P16+C4組精子凍-融后磷脂含量顯著高于其他各組(P0.05),膽固醇含量低于EY組,但差異不顯著(P0.05)。9、將上一試驗(yàn)中P16+C4組和EY組的顆粒凍精用于山羊人工授精,P16+C4組的不返情率、受胎率、產(chǎn)羔率均高于EY組(P0.05),但公、母比例低于EY組(P0.05)。結(jié)論:1.用于山羊精液5℃低溫保存時(shí),緩沖液最佳酸堿度為pH6.35,最佳滲透壓為375mOsm;配種前提高精液pH至7.2,可提高精子活力。2.同時(shí)添加14g/L的PC和6g/L的CHL可替代15%卵黃用于山羊的精液凍存。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S827

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