【摘要】：目前,抗生素耐藥性問題已引起全球的廣泛關(guān)注。然而,抗生素耐藥細(xì)菌,尤其是環(huán)境中不同種屬的多重耐藥細(xì)菌中耐藥特征與耐藥傳播機(jī)制仍不清楚。因此,本研究以大量不同種屬的雞糞源多重耐藥細(xì)菌和不同環(huán)境源的多重耐藥大腸桿菌為研究對象,系統(tǒng)研究了其抗生素耐藥表型和分子遺傳特征,主要結(jié)果如下:(1)系統(tǒng)研究了33株不同種屬(13個屬21個種)的雞糞源多重耐藥細(xì)菌中耐藥遺傳特征。采用8類11種抗生素對其進(jìn)行藥敏試驗,對其質(zhì)粒和基因組DNA同時進(jìn)行8類61種抗生素耐藥基因和18種可移動元件的檢測,并對整合子和ISCR1所介導(dǎo)的耐藥基因盒進(jìn)行檢測,主要結(jié)果如下:第一,33株菌均為多重耐藥細(xì)菌,且93.94%的菌株具有5種以上的抗生素耐藥性。第二,33株菌中共檢測到8類47種耐藥基因,每一株菌內(nèi)檢出27~36種耐藥基因,且四環(huán)素和氨基糖苷類耐藥基因檢出率最高,而鏈陽菌素類和萬古霉素類檢出率最低。第三,33株菌中共檢測到12種可移動元件,且intI1、IS26、ISAba1、ISEcp1和ISCR1的陽性檢出率均超過90%。對intI1、intI2和ISCR1的可變區(qū)進(jìn)行檢測,共得到9種不同的基因盒(739~4754bp)。intI1介導(dǎo)的基因盒種類最多為豐富多樣,有7種:dfrA12+orfF+aadA2、aadB+cat+blaOXA-10+aadA1+dfrA1+aac A4、aac(6')-II+blaOXA-21+catB3+aadA1+ybxI、dfrV、accA4+cmlA1、dfrA16+aadA2+cmlA1和aadA1;intI2和ISCR1均只攜帶一種基因盒,分別為:dfrA1+sat2+aadA1+ybeA和orf513+blaDHA-1+ampR。其中,dfrA12+orfF+aadA2的分布最為普遍(n=16),在23個intI1介導(dǎo)的基因盒中占73.91%。第四,33株菌的耐藥基因型與耐藥表型高度一致,且大環(huán)內(nèi)酯類一致性最高(96.97%)。(2)系統(tǒng)研究了不同環(huán)境來源的多重耐藥大腸桿菌中耐藥遺傳特征。以畜禽糞便、城市污水處理廠剩余污泥和醫(yī)院廢水中分離的共計55株多重耐藥大腸桿菌為研究對象,采用8類11種抗生素對其進(jìn)行藥敏試驗,對其中35株菌的質(zhì)粒和基因組DNA進(jìn)行8類61種抗生素耐藥基因、18種可移動元件及質(zhì)粒的檢測,并對整合子和ISCR1所介導(dǎo)的耐藥基因盒進(jìn)行檢測,主要結(jié)果如下:第一,55株多重耐藥大腸桿菌均具有10種以上抗生素耐藥性。第二,35株多重耐藥大腸桿菌中共檢測到8類35種抗生素耐藥基因,氨基糖苷類、磺胺類和喹諾酮類耐藥基因最為普遍,而大環(huán)內(nèi)酯類、萬古霉素類和鏈陽菌素類耐藥基因最少,且不同環(huán)境源的多重耐藥大腸桿菌所攜帶的耐藥基因種類相對一致。第三,不同環(huán)境來源的多重耐藥大腸桿菌中所攜帶質(zhì)粒的多樣性存在明顯的差異。其中,醫(yī)院廢水源耐藥大腸桿菌中所含質(zhì)粒高度一致(90%),而畜禽糞便和城市污水處理廠剩余污泥中相對多樣。第四,35株多重耐藥大腸桿菌共檢測到13種可移動元件,且ISEcp1、IS26、ISAba1、ISCR1、TnpA/Tn21和intI1在三種不同的環(huán)境中檢出率均為100%。對intI1、intI2和ISCR1的可變區(qū)進(jìn)行檢測,共得到11種不同的基因盒,其中,intI1中檢測到7種,intI2中僅檢測到同一種基因盒,ISCR1可變區(qū)檢測到3種基因盒。不同環(huán)境源的多重耐藥大腸桿菌中,intI1所攜帶耐藥基因盒的多樣性具有明顯的差異:醫(yī)院廢水源多重耐藥大腸桿菌中僅檢測到一種基因盒(dfrA17+aadA5),具有明顯的單一性和高度的一致性;糞源多重耐藥大腸桿菌中檢測到6種耐藥基因盒(dfrA17+aadA5、aadA2、aadA22、aadA23、aac(6')-Ib+aadA22和dfrA12+orfF+aadA2);而城市污水處理廠活性污泥中檢測到4種耐藥基因盒(dfrA17+aadA5、aadA22、dfrA12+orfF+aadA2和aac(6')-Ib-like+cmlA1-like),且其中有2株菌同時攜帶兩種基因盒(aadA22/dfrA17+aadA5和aadA22/dfrA12+orfF+aadA2)。不同環(huán)境中耐藥基因盒的多樣性差異,在一定程度上暗示了其所處環(huán)境的差異性和復(fù)雜程度。(3)對彭氏變形桿菌(Proteus penneri)ss4中的質(zhì)粒進(jìn)行分離測序和鑒定。第一,彭氏變形桿菌ss4中存在五條明顯的質(zhì)粒條帶,按照電泳遷移率由慢到快依次為pY1、pY2、pY3、pY4和pY5。第二,采用酶切克隆和高通量測序的方法,分別得到全長為2373bp的質(zhì)粒pY5和3263bp的pY3。第三,序列分析表明,pY3和pY5均未攜帶任何耐藥基因,但pY3攜帶三個轉(zhuǎn)座酶基因,且pY3和pY5間有一段1369bp的序列高度相似(97.31%),暗示了同一株菌內(nèi)質(zhì)粒間的相互關(guān)聯(lián)。第四,經(jīng)質(zhì)粒電泳圖譜、酶切圖譜和序列比對,證實pY4和pY5為同一質(zhì)粒的兩種形式,即pY5為超螺旋質(zhì)粒,而pY4為線型質(zhì)粒。菌株ss4的質(zhì)粒DNA中檢測到了28種耐藥基因,但質(zhì)粒pY3、pY4(或pY5)上均未攜帶任何耐藥基因,表明小質(zhì)粒不是該菌攜帶耐藥性的主要載體。該變形桿菌內(nèi)可能存在一些15kb以上的大質(zhì)粒,有待于進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.61;X172

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2348371