發(fā)布時(shí)間：2018-11-18 15:13

【摘要】：我國是禽產(chǎn)品消費(fèi)大國,禽產(chǎn)品質(zhì)量安全時(shí)常面臨獸藥殘留、病原微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。在"速生雞"事件中,養(yǎng)殖戶違規(guī)使用金剛烷胺、利巴韋林等人用抗病毒藥物,引起消費(fèi)者極大關(guān)注,同時(shí)也暴露出獸藥殘留對(duì)禽產(chǎn)品質(zhì)量安全的影響。由于利巴韋林在雞體內(nèi)的相關(guān)基礎(chǔ)性研究尚屬空白,面對(duì)違禁使用的客觀事實(shí),尚不能對(duì)此實(shí)施有效的監(jiān)管。本研究以蛋雞為研究對(duì)象,建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)法檢測(cè)血漿中的利巴韋林及主要代謝產(chǎn)物1H-1,2,4-三氮-3-甲酰胺(TCONH_2)、1-β-D-呋喃基核糖-三氮唑-3-羧酸(RTCOOH),并對(duì)利巴韋林在蛋雞體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究,同時(shí)對(duì)利巴韋林在肝微粒體體內(nèi)代謝進(jìn)行初步探索。1.蛋雞血漿中利巴韋林及主要代謝產(chǎn)物檢測(cè)方法的建立建立了同時(shí)檢測(cè)血漿中利巴韋林及其主要代謝物TCONH_2和RTCOOH的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法。以~(13)C_5-利巴韋林為內(nèi)標(biāo),雞血漿樣品加入適量甲醇沉淀蛋白,前處理樣品經(jīng)ZORBAX SB-Aq(3.0 mm×100mm,1.8μm)色譜柱分離,以0.1%甲酸水和甲醇為流動(dòng)相,梯度洗脫分離,采用正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM),內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)曲線定量。結(jié)果表明:利巴韋林、TCONH_2、RTCOOH線性范圍分別為5～5000ng/mL、5～5000ng/mL、50～5000ng/mL,相關(guān)系數(shù) r2分別為 0.9947、0.9992、0.9976。高、中、低三個(gè)濃度(1000、100、10 ng/mL)質(zhì)控樣品的添加回收率,均在84.1%～108.2%之間,批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1.6%～13.4%(n=6),批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差3.8%～16.9%(n=12)。利巴韋林、TCONH_2、RTCOOH在血漿樣品中的的檢出限分別為2、2、10ng/mL,定量限為5、5、20 ng/mL。該方法快速省時(shí),有效地排除了內(nèi)源性干擾,分離了利巴韋林、TCONH_2、RTCOOH,并采用MRM模式測(cè)定,定性準(zhǔn)確。本方法線性范圍寬,重復(fù)性好,適用于血漿樣品中利巴韋林及主要代謝產(chǎn)物的測(cè)定。2.利巴韋林在蛋雞體內(nèi)代謝規(guī)律初步研究京紅蛋雞單劑量口服灌喂利巴韋林30mg/kg BW,采集給藥后不同時(shí)間點(diǎn)的靜脈血,以超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定血漿中利巴韋林濃度。結(jié)果顯示,給藥后血漿中利巴韋林濃度迅速升高,隨著代謝消除的進(jìn)行,血藥濃度逐漸下降,24h時(shí)血藥濃度低于方法檢出限。采用非房室藥動(dòng)力學(xué)軟件WinNonlin 6.3對(duì)血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù):藥時(shí)曲線下面積(AUC_(0-t))、血漿消除半衰期(T_(1/2β))、達(dá)峰時(shí)間(T_(max))、達(dá)峰濃度(C_(max))分別為(10658.18±2627.348)h·ng/mL、(2.9461±0.9010)h、(1.5909±0.7355)h、(2796.54±1120)ng/mL。數(shù)據(jù)表明,蛋雞口服給藥利巴韋林后吸收迅速,到達(dá)峰值時(shí)間短,體內(nèi)分布廣,消除速度快。TCONH_2和RTCOOH在蛋雞血漿中的濃度隨著原藥的吸收代謝,呈現(xiàn)先升高后下降趨勢(shì),24h后均低于檢出限,呈現(xiàn)出穩(wěn)定的生成和消除過程。利巴韋林在血漿中的代謝產(chǎn)物以RTCOOH為主,約占70%,且RTCOOH在兩種代謝物中所占比例隨時(shí)間進(jìn)行呈緩慢下降趨勢(shì),最終穩(wěn)定在75%。3.利巴韋林在雞肝微粒體中體外模擬代謝研究采集空白蛋雞肝臟組織,并用差速離心法制備肝微粒體,研究肝微粒體蛋白濃度、體外孵育時(shí)間和孵育條件對(duì)利巴韋林代謝消除的影響,并采用線性離子阱質(zhì)譜對(duì)代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,利巴韋林不與肝微粒體反應(yīng),孵育樣品中無TCONH_2和RTCOOH,經(jīng)線性離子阱質(zhì)譜掃描,沒有發(fā)現(xiàn)未知代謝產(chǎn)物。由此可以認(rèn)定,利巴韋林不受肝微粒體CYP 450酶的代謝作用。
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【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S859.7;O657.63

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉凱;王麗娜;李建忠;;飼料和雞肉中利巴韋林的測(cè)定——超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[J];現(xiàn)代畜牧獸醫(yī);2014年05期

2 陳燕;李曉雯;劉暢;;禽畜肉中利巴韋林殘留量檢測(cè)方法的研究[J];食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào);2014年03期

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本文編號(hào)：2340395