發(fā)布時間：2018-11-17 12:44

【摘要】：H9N2亞型禽流感病毒(H9N2 avian influenza virus,AIV)是低致病性的流感病毒。雞群感染流感病毒后引起免疫系統(tǒng)功能抑制,對多種病原易感性增加,易繼發(fā)感染大腸桿菌等細菌性疾病或更嚴重的臨床疾病。HD-11是雞巨噬細胞,是禽重要的先天免疫細胞。本研究通過H9N2 AIV感染HD-11細胞模擬機體抗病毒感染的先天免疫反應(yīng),利用免疫熒光方法特異的檢測H9N2流感病毒在細胞內(nèi)的感染情況;用1 MOI H9N2 AIV感染HD-11細胞,收集感染后0,6,12,24,36,48,72 h的細胞樣品,利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測細胞模式識別受體,細胞因子,趨化因子以及iNOS基因mRNA表達變化量。通過上述研究方法,我們?nèi)〉昧巳缦略囼灲Y(jié)果:1.HD-11細胞感染病毒12 h后,橢圓形或梭形的HD-11細胞開始逐漸皺縮變圓,隨后出現(xiàn)胞膜邊緣不齊、拉絲、聚團、空泡、脫落等明顯的細胞病變現(xiàn)象。感染H9N2AIV 36 h后,H9N2 AIV NP蛋白單抗免疫熒光染色,細胞核周圍可見明亮綠色,流感病毒在細胞內(nèi)分布。2.實時熒光相對定量結(jié)果顯示chTLR7 mRNA在感染后12 h開始顯著上調(diào),感染后48 h,上調(diào)3.8倍,達到頂峰。chMDA5 mRNA在感染后一直顯著上調(diào),72 h上調(diào)到102.5倍。chMDA5 mRNA上調(diào)作用較chTLR7mRNA更強些。IL-1β,IL-2,IL-6細胞因子mRNA隨著流感病毒作用時間延長開始顯著上調(diào),36h表達量上調(diào)到最大值,隨后呈顯著下調(diào)趨勢但仍高于對照組。IFN-α,IFN-βI型干擾素的mRNA轉(zhuǎn)錄水平從感染后24 h開始顯著上調(diào),72 h分別上調(diào)到48.8倍和11.3倍。XCL1和CXCLi1趨化因子mRNA在感染后12 h開始顯著上調(diào),XCL1 mRNA 36h上調(diào)值最大,CXCLi1趨化因子mRNA在感染后48 h達到最大值,然后都開始下調(diào);CXCLi2趨化因子mRNA在感染后36 h開始顯著上調(diào),72 h上調(diào)到20倍。iNOS mRNA在病毒感染后12 h開始顯著上調(diào),36 h上調(diào)到最大值,上調(diào)4.3倍。初步探索了流感病毒對機體先天免疫功能的影響。
[Abstract]:H9N2 subtype avian influenza virus (H9N2 avian influenza virus,AIV) is a low-pathogenic influenza virus. Chickens infected with influenza virus cause inhibition of immune system, increase susceptibility to various pathogens, and secondary infection with bacterial diseases such as Escherichia coli or more serious clinical diseases. HD-11 is a chicken macrophage. It is an important innate immune cell in birds. In this study, HD-11 cells infected with H9N2 AIV were used to simulate the innate immune response of human body to antiviral infection, and specific immunofluorescence method was used to detect the infection of H9N2 influenza virus in cells. HD-11 cells were infected with 1 MOI H9N2 AIV. The cell samples were collected for 72 h after infection. The expression of cell pattern recognition receptor, cytokines, chemokines and iNOS gene mRNA were detected by real-time fluorescence quantitative PCR. Through the above research methods, we obtained the following results: after 1.HD-11 cells were infected with the virus for 12 h, the elliptical or fusiform HD-11 cells began to shrink and round gradually, and then the membrane edge was irregular, drawing wire, agglomeration, vacuoles, and so on. Abscission and other obvious cytopathic phenomena. After 36 h of H9N2AIV infection, the H9N2 AIV NP protein monoclonal antibody was stained with immunofluorescence, the nucleus around the nucleus was bright green, and the influenza virus was distributed in the cells. The results of real-time fluorescence relative quantitative analysis showed that chTLR7 mRNA increased significantly at 12 h after infection and 3.8 times at 48 h after infection, reaching its peak. ChMDA5 mRNA was significantly up-regulated after infection. The up-regulation of chMDA5 mRNA was stronger than that of chTLR7mRNA at 72 h. IL-1 尾, IL-2,IL-6 cytokine mRNA began to be upregulated significantly with the prolongation of influenza virus exposure, and the expression of mRNA increased to the maximum at 36h. The mRNA transcription level of IFN- 偽, IFN- 尾 I interferon increased significantly 24 hours after infection. XCL1 and CXCLi1 chemokine mRNA began to increase significantly at 12 h after infection, XCL1 mRNA at 36 h was the highest, and CXCLi1 chemokine mRNA reached the maximum at 48 h after infection, and then down-regulated. CXCLi2 chemokine mRNA increased significantly at 36 h after infection, increased to 20 fold at 72 h, increased significantly at 12 h after infection, reached the maximum at 36 h, and increased 4.3 times. The effect of influenza virus on innate immune function was preliminarily explored.
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;科學家給出全球流感病毒傳播“路線圖”[J];中華中醫(yī)藥學刊;2008年06期

2 ;甲型H1N1流感病毒[J];飼料工業(yè);2009年10期

3 ;為什么“豬流感病毒”改稱甲型H1N1流感病毒?[J];中華疾病控制雜志;2009年03期

4 李皓;;流感病毒與防控措施[J];科技潮;2009年12期

5 ;A型流感病毒復(fù)制機理研究獲進展[J];中國家禽;2013年08期

6 陳慧英;;流感病毒將可“定位追蹤”[J];瀘州科技;2013年03期

7 ;高溫、紫外線等是流感病毒的克星[J];農(nóng)村科學實驗;2005年12期

8 鄭賓;鐘江;;禽流感蔓延給人類敲響警鐘[J];科學生活;2005年11期

9 張?zhí)锟?;從“小病”到“大疫”:多變的流感病毒[J];中國新聞周刊;2013年03期

10 王小平;;流感病毒的變異[J];大自然探索;1989年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 伍銳;段正贏;劉澤文;楊克禮;梁望旺;鄧均華;周丹娜;田永祥;;A型流感病毒為載體的開發(fā)及其應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第八次學術(shù)研討會論文集[C];2010年

2 杜雄偉;李葉;楊卓;;A型流感病毒對小鼠致病機制的研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學術(shù)研討會論文集（上冊）[C];2009年

3 曲敬來;;流感病毒A上呼吸道感染快速診治的研究[A];中醫(yī)藥防治感染病之研究（九）——第九次全國中醫(yī)藥防治感染病學術(shù)交流大會論文集[C];2009年

4 高福;;流感病毒侵入與多肽抑制藥物[A];第二屆傳染病診治高峰論壇暨2009年浙江省感染病、肝病學術(shù)年會論文匯編[C];2009年

5 楊琴;張興曉;楊靈芝;郭慶棟;;流感病毒在三種細胞中的生長對比[A];山東畜牧獸醫(yī)學會禽病學專業(yè)委員會第一次學術(shù)研討會論文集[C];2009年

6 袁達康;黃勇;楊華可;黎景全;李艷芬;;東莞市2004-2008年流感病毒監(jiān)測結(jié)果及分析[A];新發(fā)傳染病防治學習研討會論文集[C];2008年

7 高玉偉;夏咸柱;扈榮良;王立剛;劉丹;鄒嘯環(huán);黃耕;賀文琦;;虎流感病毒的分離、鑒定、基因分析與抗體調(diào)查(摘要)[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會成立20周年慶典暨第十次學術(shù)研討會論文集（下）[C];2003年

8 李葉;廖明;辛朝安;;A型流感病毒對小鼠致病機制的研究進展[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

9 曲敬來;常曉;;流感病毒A上呼吸道感染快速診治的研究[A];2005年全國危重病急救醫(yī)學學術(shù)會議學術(shù)論文集[C];2005年

10 祝艷華;王雯慧;陳懷濤;;中藥抗流感病毒作用的研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)病理學分會第十五次、中國病理生理學會動物病生專業(yè)委員會第十四次學術(shù)討論會論文集[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 記者 江卉邋通訊員 胡運海 實習生 汪紅燕;今冬江城流感病毒有加劇趨勢[N];湖北日報;2008年

2 ;新流感病毒可能已在豬身上悄悄傳播多年[N];新華每日電訊;2009年

3 記者 葛進　陳超;日拍到新型流感病毒真實形態(tài)[N];科技日報;2009年

4 特約記者 吳志軍　記者 蔡鵬程;研制成功迅速殺滅流感病毒新產(chǎn)品[N];解放軍報;2009年

5 河北省邢臺市第一醫(yī)院副主任醫(yī)師 黃根柱;流感病毒有四怕[N];健康報;2009年

6 本報記者 馬佳;陳繼明：為流感病毒繪制族譜[N];北京科技報;2009年

7 江南雪舞;禽流感病毒與流感病毒有何關(guān)系？[N];大眾衛(wèi)生報;2005年

8 主任醫(yī)師 冀衡;流感病毒[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2003年

9 楊孝文　編譯;揭開20世紀初西班牙大流感致命秘密[N];北京科技報;2007年

10 本報駐美國記者 毛黎;“狼”依然在家門口徘徊[N];科技日報;2008年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 張文婧;抗A型流感病毒和腸道病毒71型天然化合物的篩選及其抗病毒分子機制研究[D];武漢大學;2012年

2 吳玲;A型流感病毒四種亞型同步檢測分型方法建立及兩株H5N1亞型禽流感病毒地方株的特性研究[D];武漢大學;2013年

3 范文輝;犬Ⅲ型干擾素的功能特點及B型流感病毒NEP蛋白出核功能研究[D];廣西大學;2015年

4 申新田;寡聚噻吩及皂苷類衍生物抑制流感病毒進入靶細胞的作用及機制[D];南方醫(yī)科大學;2015年

5 趙化陽;小鼠動物模型在哮喘氣道高反應(yīng)治療和抗流感藥物篩選中的應(yīng)用研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2015年

6 房家立;A型流感病毒感染誘導COX2基因表達機制研究[D];武漢大學;2011年

7 徐一鳴;流感病毒多亞型檢測方法的研制和應(yīng)用[D];吉林大學;2009年

8 朱紫祥;p53在I型干擾素介導的先天性抗甲型流感病毒中的作用研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2013年

9 張守平;p-STAT1蛋白參與調(diào)節(jié)A型流感病毒的復(fù)制及炎性反應(yīng)的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2015年

10 靳遠;甲型流感病毒重要亞型的進化研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 孟慧芝;A型流感病毒條形碼檢測技術(shù)研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學;2015年

2 胡云光;人季節(jié)性流感病毒H3N2小鼠適應(yīng)株的建立及分子機制的初步探究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

3 劉兵;SPF雞與BALB/c小鼠體內(nèi)流感病毒唾液酸受體組織分布的差異性分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

4 戴玉柱;五重熒光定量RT-PCR檢測甲型流感病毒方法的建立和應(yīng)用及2010～2013年杭州地區(qū)人H3N2病毒流行病學分析[D];浙江大學;2015年

5 孫偉洋;B型流感病毒感染性克隆的構(gòu)建及其免疫原性研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

6 王靜;HD-11細胞感染H9N2流感病毒后先天性免疫相關(guān)基因mRNA表達變化的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

7 徐克敏;華南地區(qū)鴨源性H9亞型流感病毒的基因特性研究[D];汕頭大學;2002年

8 顏艷;A型流感病毒冷適應(yīng)減毒株拯救體系的建立[D];西北農(nóng)林科技大學;2007年

9 岳秀芳;B型流感病毒的遺傳特性分析與感染性克隆的構(gòu)建[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2013年

10 張力燕;貂源H9亞型流感病毒的分離鑒定與血清學調(diào)查[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2014年

，

本文編號：2337825