【摘要】：為了研究H9N2亞型禽流感病毒(AIV)在家禽體內(nèi)各個(gè)器官的分布,試驗(yàn)針對(duì)H9N2亞型AIV的HA基因設(shè)計(jì)1對(duì)特異性引物,同時(shí)設(shè)計(jì)1對(duì)擴(kuò)增內(nèi)參基因β-actin的引物,以陽性重組質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法,并對(duì)人工感染H9N2的SPF雛雞氣管、胸腺、肺臟、肝臟、脾臟、腎臟、腸等器官進(jìn)行3次重復(fù)檢測(cè)。結(jié)果表明:該法線性關(guān)系R值均在0.99以上,檢測(cè)極限均為10拷貝質(zhì)粒DNA,比RT-PCR靈敏100倍以上;特異性好,批內(nèi)和批間重復(fù)性試驗(yàn)變異系數(shù)均小于1%。通過比較各器官HA相對(duì)表達(dá)量,得出腸和胰腺中HA相對(duì)表達(dá)量最高,腺胃次之,脾臟、肝臟、胸腺、法氏囊中含量也比較高,氣管、肺臟、腎臟中含量較低,其中腎臟含量最低。說明研究建立的H9N2亞型禽流感病毒熒光定量RT-PCR方法靈敏度高,特異性強(qiáng)。
[Abstract]:In order to study the distribution of (AIV) of H9N2 subtype avian influenza virus in various organs of poultry, a pair of specific primers were designed for the HA gene of H9N2 subtype AIV, and a pair of primers were designed to amplify the 尾-actin gene of internal reference gene. Using the positive recombinant plasmid as the standard curve, a fluorescent quantitative RT-PCR method was established, and the trachea, thymus, lung, liver, spleen, kidney, intestine and other organs of SPF chicks artificially infected with H9N2 were detected for three times. The results showed that the linear relationship R values of the method were all above 0.99, the detection limit of 10 copies plasmid DNA, was more than 100 times more sensitive than RT-PCR, the specificity of the method was good, and the coefficient of variation of intra-and inter-assay reproducibility test was less than 1g. By comparing the relative expression of HA in various organs, it was found that the relative expression of HA was the highest in intestine and pancreas, followed by glandular stomach, spleen, liver, thymus, bursa of Fabricius, and lower in trachea, lung and kidney. The kidney content was the lowest. The results showed that the fluorescent quantitative RT-PCR method of H9N2 subtype avian influenza virus was highly sensitive and specific.
【作者單位】： 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)室;山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所;
【基金】：山東省農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新體系家禽團(tuán)隊(duì)崗位經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目(SDAIT-11-09)
【分類號(hào)】：S855.3

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本文編號(hào)：2334448