【摘要】：鴨坦布蘇病毒病自2010年初流行以來,已經(jīng)成為危害我國養(yǎng)鴨業(yè)的主要疾病之一。產蛋鴨發(fā)病后表現(xiàn)為持續(xù)性產蛋率低下,加之繼發(fā)感染,死淘率可達到15%-20%。本研究從山東某鴨養(yǎng)殖場無菌采集有疑似坦布蘇病毒(Tembusu virus,TMUV)感染癥狀的病鴨,開展了以下研究:根據(jù)保守序列設計的特異性引物,采用RT-PCR技術,通過病毒分離、鑒定的方法,獲得鴨坦布蘇病毒;通過設計相互覆蓋TMUV cDNA全長的引物,分段擴增、測序、拼接獲得了TMUV分離株全長基因組序列;通過對200日齡櫻桃谷產蛋鴨人工致病的動態(tài)病理學觀察,證明病毒的主要靶器官為卵巢,明確了病毒感染產蛋鴨的卵巢病變產生時間、病變程度、以及與病毒載量的關系;將采集的病料組織剪碎、研磨、離心、過濾除菌后,接種于9日齡健康鴨胚,收集尿囊液按照常規(guī)病毒分離方法進行盲傳。該病毒在鴨胚傳代過程中,盲傳至3代以后,病毒液可導致鴨胚于3-4d內死亡,并使鴨胚胚體水腫、出血,胚肝水腫、壞死。經(jīng)病毒理化性質鑒定,病毒的核酸類型為RNA,病毒為有囊膜病毒,不耐酸,對氯仿、乙醚等有機溶劑敏感,符合黃病毒成員的基本生物學特征。對收集的尿囊液經(jīng)RT-PCR檢測,其他幾種常見鴨源病原如鴨瘟病毒(Duck plague virus,DPV)、鴨圓環(huán)病毒(Duck circovirus,DuCV)、鴨乙型肝炎病毒(Duck Hepatitis B Virus,DHBV)、鴨源禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)檢測均為陰性。根據(jù)TMUV-WR株NS3-NS4片段保守序列設計的特異性引物通過RT-PCR方法擴增出疑似目的條帶(300 bp),經(jīng)測序、比對后發(fā)現(xiàn),與已公布的黃病毒科黃病毒屬恩他耶病毒IPDIA分離株核苷酸(GenBankNO:NC_018705)相似性為75.3%,與國內己公布的TMUV分離株相比,同DK/TH/CU-1株(GenBankNO:KR061333.1)同源性最高,為95%,同GX/1/12株(GenBankNO:KP719117.1)同源性最低,為91%。成功獲得一株源于山東地區(qū)的鴨坦布蘇病毒,命名為SDT1,為開展后續(xù)研究奠定科學基礎。通過設計相互覆蓋TMUV cDNA全長的引物,分段擴增、測序、拼接獲得了分離株全長基因組序列。全基因組序列分析結果表明,SDT1分離株全長10992 nt,含有一個開放閱讀框(ORF),編碼一個長為2625 aa的多聚蛋白,預測的多聚蛋白切割位點與其他TMUV成員一致,共編碼10個功能蛋白。黃病毒代表成員以及坦布蘇病毒分離株的進化樹分析表明,SDT1分離株屬于黃病毒屬恩他耶家族成員,SDT1分離株與其他TMUV成員在全基因}D核苷酸和氨基酸相似性分別為95%-98%,98.4%-99.6%。與國內其他分離株相比,SDT1分離株同其他分離株的平均進化距離(0.0299)高于其他毒株之間的平均進化距離(0.0163),本研究豐富了鴨坦布蘇病毒庫。選取30只200日齡的產蛋j夜妊冀辛嘶毓槎鍤笛，

本文編號：2300354