【摘要】：將編碼禽戊型肝炎病毒(a HEV)衣殼蛋白的ORF2基因片段克隆入原核表達載體p ET-30a(+)中,構(gòu)建重組質(zhì)粒p ET-30a(+)-ORF2。質(zhì)粒經(jīng)鑒定正確后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌Rosseta中篩選陽性菌,陽性菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后檢測目的蛋白表達情況。用表達的重組蛋白免疫新西蘭白兔制備多克隆抗體,應(yīng)用間接ELISA檢測抗體效價。將衣殼蛋白主要抗原區(qū)域ORF2Δ250(251~606 aa)基因片段克隆入乳酸菌表達載體p TX8048中獲得陽性質(zhì)粒p TX8048-ORF2Δ250,質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化入宿主菌Lactococcus lactis NZ9000中篩選陽性菌p TX8048-ORF2Δ250/L.lact is NZ9000。陽性菌經(jīng)Nisin誘導(dǎo)后采用West ern-blot檢測目的蛋白表達情況。結(jié)果表明,a HEV衣殼蛋白在大腸桿菌中以包涵體形式表達,制備的多克隆抗體效價為1∶216。重組菌p TX8048-ORF2Δ250/L.lactis NZ9000經(jīng)Nisin誘導(dǎo)后,Western-blot檢測到約55 ku的目的蛋白。上述研究結(jié)果將為雞戊型肝炎乳酸菌疫苗研究提供參考。
[Abstract]:The ORF2 gene fragment encoding (a HEV) capsid protein of avian hepatitis E virus was cloned into prokaryotic expression vector p ET-30a (), and the recombinant plasmid p ET-30a ()-ORF2. was constructed. The plasmid was correctly identified and transformed into E. coli Rosseta to screen the positive bacteria. The expression of the target protein was detected by IPTG induction of the positive bacteria. The polyclonal antibody was prepared by immunizing New Zealand white rabbits with the expressed recombinant protein and the titer of the antibody was detected by indirect ELISA. The main antigen region of capsid protein ORF2 螖 250 (251 aa) was cloned into the expression vector p TX8048 of lactic acid bacteria to obtain the positive plasmid p TX8048-ORF2 螖 250. The plasmid was electrotransformed into the host strain Lactococcus lactis NZ9000 to screen the positive strain p TX8048-ORF2 螖 250/L.lact is NZ9000.. Positive bacteria were induced by Nisin to detect the expression of target protein by West ern-blot. The results showed that, a HEV capsid protein was expressed as inclusion body in E. coli, and the titer of polyclonal antibody was 1: 216. After the recombinant strain p TX8048-ORF2 螖 250/L.lactis NZ9000 was induced by Nisin, the target protein of about 55 ku was detected by Western-blot. The above results will provide reference for the study of chicken hepatitis E lactic acid bacteria vaccine.
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院;西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;
【基金】：黑龍江省自然科學(xué)基金項目(C201422) 黑龍江省博士后啟動基金項目(LBH-Q14019)
【分類號】：S852.65

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：2298940