【摘要】：二硝托胺是一種有效的硝基酰胺類抗球蟲藥,在禽類生產(chǎn)中應(yīng)用十分廣泛。然而,長期連續(xù)不規(guī)范用藥會使藥物以原形藥物或代謝產(chǎn)物的形式在禽類組織中累積,造成禽組織中獸藥殘留。長期食用含有二硝托胺及其代謝產(chǎn)物的動物食品及其制品,獸藥會在人體中累積,對人類健康造成威脅。目前,關(guān)于二硝托胺及其代謝產(chǎn)物(3-氨基-5-硝基鄰甲苯酰胺,3-ANOT)在家禽組織中的殘留確證分析方法主要為液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法,而用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀器分析方法對禽組織中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物殘留檢測的研究還未見報道。本研究以京海黃雞為試驗素材,利用加速溶劑萃取和固相萃取技術(shù),建立了雞肌肉、肝臟、腎臟、皮膚+脂肪及雞蛋中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物殘留氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜確證分析方法(GC-MS/MS),為動物源性食品中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物殘留檢測標(biāo)準的制定提供科學(xué)依據(jù),為殘留監(jiān)控提供新的技術(shù)手段。本試驗主要研究結(jié)果如下:1.首次分別建立和優(yōu)化了采用加速溶劑萃取儀(ASE350)從雞組織(肌肉、肝臟、腎臟、皮膚+脂肪)和雞蛋中同時提取二硝托胺及其代謝產(chǎn)物殘留的方法。乙腈作為提取溶劑,樣品與硅藻土研磨混勻裝填入萃取池,80℃、1500 psi條件下,在線去脂(正己烷作為除脂劑)與二硝托胺及其代謝產(chǎn)物萃取(乙腈作為萃取劑)連續(xù)進行。當(dāng)二硝托胺及其代謝產(chǎn)物添加水平分別為定量限(LOQ)、0.5MRL(最高殘留限量)、1MRL、2MRL時,雞肌肉、肝臟、腎臟、皮膚+脂肪樣品中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物的平均回收率均在81.96%-94.31%之間,相對標(biāo)準偏差均在1.72%-5.37%之間;雞蛋清、蛋黃和全蛋樣品中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物的平均回收率均在82.74%-87.49%之間,相對標(biāo)準偏差均在1.73%-4.63%之間。該提取方法節(jié)省溶劑、樣品基質(zhì)影響小、萃取效率高、回收率高、方便、快速和全自動。2.首次分別建立和優(yōu)化了雞組織(肌肉、肝臟、腎臟、皮膚+脂肪)和雞蛋中同時檢測二硝托胺及其代謝產(chǎn)物殘留的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)確證檢測方法。采用EI模式,全掃描(SCAN)定性,Auto SRM結(jié)合外標(biāo)法定量,在空白肌肉、腎臟、皮膚+脂肪、蛋清中添加二硝托胺及其代謝產(chǎn)物L(fēng)OQ-200.0 μg/kg濃度范圍內(nèi),定量離子對的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān),且線性關(guān)系良好,決定系數(shù)(R2)均高于0.9993;在空白肝臟中添加二硝托胺及其代謝產(chǎn)物L(fēng)OQ-1600.0 μg/kg濃度范圍內(nèi),定量離子對的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān),且線性關(guān)系良好,決定系數(shù)(R2)高于0.9993;在空白蛋黃和全蛋中添加二硝托胺及其代謝產(chǎn)物L(fēng)OQ-1800.0 μg/kg濃度范圍內(nèi),定量離子對的色譜峰面積與其濃度呈線性相關(guān),且線性關(guān)系良好,決定系數(shù)(R2)均高于0.9995。精密度測定結(jié)果:當(dāng)二硝托胺及其代謝產(chǎn)物添加水平分別為定量限(LOQ)、0.5MRL(最高殘留限量)、1MRL、2MRL時,雞肌肉、肝臟、腎臟、皮膚+脂肪樣品中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物日內(nèi)相對標(biāo)準偏差均在1.87%-5.74%之間,日間相對標(biāo)準偏差均在3.34%-7.36%之間;雞蛋清、蛋黃和全蛋樣品中二硝托胺及其代謝產(chǎn)物日內(nèi)相對標(biāo)準偏差均在2.96%-5.21%之間,日間相對標(biāo)準偏差均在3.94%-6.34%之間。在優(yōu)化的試驗條件下,二硝托胺及其代謝產(chǎn)物在雞肌肉、肝臟、腎臟、皮膚+脂肪中的檢測限(LOD)在 0.8-2.5 μg/kg(S/N≥3),LOQ 在 2.7-8.0 μg/kg(S/N10);二硝托胺及其代謝產(chǎn)物在雞蛋清、蛋黃和全蛋中的LOD在0.8-2.8 μg/kg(S/N≥3),LOQ在3.0-10.0μg/kg(S/N≥10)。方法驗證參數(shù)均滿足中國農(nóng)業(yè)部、歐盟和美國FDA獸藥殘留檢測的要求,定量準確、快速、靈敏度高。
[Abstract]:Nitinol is an effective class of anti-coccidial drugs, which is widely used in poultry production. However, long-term continuous non-standardized administration will cause the drug to accumulate in poultry tissue in the form of a prototype drug or metabolite, causing the veterinary drug residue in the avian tissue. The long-term edible animal food containing dinitrogen and its metabolites and its products and veterinary drugs are accumulated in the human body and pose a threat to human health. At present, the residual confirmatory analysis method for the dinitrogen and its metabolites (3-amino-5-nitro o-toluidine, 3-ANOT) in poultry tissues is mainly liquid chromatography-tandem mass spectrometry, The results of GC-tandem mass spectrometer (GC-MS) analysis were not yet reported. In this study, the method of GC-MS/ MS was established by using accelerated solvent extraction and solid phase extraction technique to establish the residual gas chromatography-tandem mass spectrometry (GC-MS/ MS) in chicken muscle, liver, kidney, skin + fat and eggs. The invention provides a scientific basis for establishing a standard for detecting the residual detection standards of the dinitrogen and the metabolites in the animal source food, and provides a new technical means for the residual monitoring. The main results of this study were as follows: 1. A method was established and optimized for the first time using an accelerated solvent extractor (ASE350) from chicken tissue (muscle, liver, kidney, skin + fat) and eggs. Acetonitrile is used as an extraction solvent, and the sample is ground and mixed with diatomite to be filled into an extraction tank, 80 DEG C and 1500 psi, and the on-line de-fat (n-hexane as a degreasing agent) is continuously carried out with the dinitrobutamine and the metabolite thereof (acetonitrile as an extracting agent). The average recoveries were 81. 96%-94. 31% in chicken muscle, liver, kidney, skin + fat sample, and the average recovery was 81. 96%-94. 31%, respectively, when the levels of nitrate and their metabolites were the limit of quantitation (LOQ), 0. 5MRL (maximum residual limit), 1MRL and 2MRL, respectively. The relative standard deviation was between 1. 72% and 5. 37%; the average recovery rate of sodium dinitrate and its metabolites in egg white, yolk and whole egg samples was 82. 74% -87. 49%, and the relative standard deviation was between 1.73% and 4.63%. The extraction method saves the solvent, the influence of the sample matrix is small, the extraction efficiency is high, the recovery rate is high, and the extraction method is convenient, rapid and full-automatic. Gas chromatography-tandem mass spectrometry (GC-MS/ MS) was established and optimized for the first time in chicken tissues (muscle, liver, kidney, skin + fat) and eggs. The chromatographic peak area of quantitative ion pair was linearly related to its concentration in the range of blank muscle, kidney, skin + fat and egg white by using EI mode, full-scan (SCAN) qualitative and auto SRM combined with external standard method. In the blank liver, the peak area of the chromatographic peak of the quantitative ion pair is linearly related with its concentration, and the linear relation is good, and the coefficient of separation (R2) is higher than 0.99993; The peak area of the chromatographic peak of the quantitative ion pair was linearly related to its concentration in the blank yolk and the whole egg and the concentration range of LOQ-1800. 0ug/ kg. The linear relation was good and the thermodynamic coefficient (R2) was higher than 0. 9995. The results of precision determination: The relative standard deviation was between 1. 87% and 5. 74% in chicken muscle, liver, kidney, skin + fat sample, and the relative standard deviation in chicken muscle, liver, kidney, skin + fat samples, respectively, when the levels of nitrate and its metabolites were at the limit of quantitation (LOQ), 0. 5MRL (maximum residual limit), 1MRL and 2MRL, respectively. The relative standard deviation of day relative standard deviation was between 3.34% -7.36%, the relative standard deviation was 2.96% -5.21% in egg white, yolk and whole egg sample, and the relative standard deviation of day was between 3.94% -6.34%. The detection limit (LOD) in chicken muscle, liver, kidney, skin + fat (LOD) in chicken muscle, liver, kidney, skin + fat was 0.8 -2. 5 ug/ kg (S/ N/ 3), the LOQ was 2. 7-8. 0 ug/ kg (S/ N10), the LOD was 0.8 -2. 8 ug/ kg (S/ N/ 3) in egg white, yolk and whole egg. LOQ was 3.0-10.0. mu.g/ kg (S/ N/ 10). Method Validation parameters met the requirements of China's Ministry of Agriculture, the European Union and the United States Agency for Veterinary Drug Residues Detection, with accurate, accurate, rapid and high sensitivity.
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S859.84

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本文編號：2281216