【摘要】：綿羊是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物,為人類(lèi)提供所需的毛、肉等產(chǎn)品。目前,利用凍精進(jìn)行人工授精、體外受精等手段可提高綿羊的繁殖效率,同時(shí)還可降低飼養(yǎng)成本。然而綿羊凍精,特別是非繁殖季節(jié)綿羊凍精質(zhì)量較差,導(dǎo)致凍精的利用率較低。目前仍未找到適合綿羊精子生理特性的冷凍稀釋液。為改善全季綿羊冷凍精液品質(zhì),本研究分別在繁殖季節(jié)(11月)及非繁殖季節(jié)(6月)對(duì)7只特克賽爾公羊進(jìn)行采精,并將同季節(jié)不同個(gè)體精液混和。在冷凍稀釋液中分別添加IGF-I和GSH,用一步稀釋法制作細(xì)管凍精。精液解凍后,分別溫育0、1及2 h,應(yīng)用SYBR-14/PI熒光雙染法、低滲腫脹實(shí)驗(yàn)和吖啶橙染色分別測(cè)定精子的頂體膜、質(zhì)膜和DNA完整率。利用解凍精子進(jìn)行體外受精、體外培養(yǎng),并測(cè)定卵裂率和囊胚率。共同探索不同季節(jié)條件下對(duì)綿羊冷凍精子質(zhì)量的影響,以及添加IGF-I和GSH對(duì)繁殖季節(jié)及非繁殖季節(jié)凍精質(zhì)量的影響,為提高凍精利用效率提供理論依據(jù)。結(jié)果如下:1、不同季節(jié)(繁殖季節(jié)、非繁殖季節(jié))對(duì)冷凍解凍后精子質(zhì)量的影響:繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜的完整性以及體外受精后的卵裂率和囊胚率都顯著高于非繁殖季節(jié)。2、在冷凍稀釋液中添加不同濃度IGF-I(0、50、100、150、250 ng/mL)對(duì)繁殖季節(jié)凍精質(zhì)量的影響:添加50、100、150 ng/m L IGF-I精子頂體膜完整率在解凍初期顯著高于對(duì)照組(P0.05)。添加100 ng/m L IGF-I精子質(zhì)膜及DNA完整率在解凍溫育1 h時(shí)顯著高于其對(duì)照組(P0.05),而添加150、250 ng/mL IGF-I顯著降低精子頂體膜及質(zhì)膜的完整率(P0.05)。因此在冷凍稀釋液中添加100 ng/m L IGF-I可提高繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜、DNA的完整性。3、在冷凍稀釋液中添加不同濃度IGF-I(0、50、100、150、250 ng/mL)對(duì)非繁殖季節(jié)凍精質(zhì)量的影響:添加100 ng/mL IGF-I在初解凍、解凍后溫育1及2 h時(shí)能顯著提高精子頂體膜完整率(P0.05)。添加100、150 ng/m L IGF-I在初解凍及解凍后溫育1 h時(shí)能顯著提高精子質(zhì)膜完整率(P0.05)。添加250 ng/mL IGF-I在解凍后溫育1、2 h時(shí)顯著降低精子DNA完整率(P0.05)。添加100、150 ng/m L IGF-I可提高非繁殖季節(jié)凍精解凍后體外受精的卵裂率。因此在冷凍稀釋液中添加100 ng/m L IGF-I可提高非繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜的完整性,提高體外受精后的卵裂率。4、在冷凍稀釋液中添加不同濃度GSH(0、1、2、2.5、3 m M)對(duì)繁殖季節(jié)凍精質(zhì)量的影響:添加1 mM GSH在初解凍及解凍后溫育1 h時(shí)能提高精子頂體膜完整率(P0.05)。添加1、2 mM GSH在初解凍及解凍后溫育1、2 h時(shí)能顯著提高精子質(zhì)膜完整率(P0.05)。添加1 mM GSH在初解凍及解凍后溫育1、2 h時(shí)能顯著提高精子DNA完整率(P0.05)。因此在冷凍稀釋液中添加1 mM GSH可提高繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜及DNA的完整性。5、在冷凍稀釋液中添加不同濃度GSH(0、1、2、2.5、3 mM)對(duì)非繁殖季節(jié)凍精質(zhì)量的影響:添加1 mM GSH在初解凍及解凍后溫育1 h時(shí)能顯著提高精子頂體膜完整率(P0.05)。添加1 mM GSH在解凍溫育1 h時(shí)顯著提高精子質(zhì)膜完整率(P0.05)。在冷凍稀釋液中添加1 mM GSH可提高非繁殖季節(jié)凍精解凍后體外受精的卵裂率及囊胚率。因此在冷凍稀釋液中添加1 mM GSH可提高非繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜的完整性,提高體外受精后的卵裂率及囊胚率。綜上所述,繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜完整性,及體外受精后的效果都好于非繁殖季節(jié)。在冷凍稀釋液中添加IGF-I 100 ng/mL或GSH 1 mM對(duì)提高繁殖季節(jié)頂體膜及質(zhì)膜完整性效果較好,同時(shí)也可改善非繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜的完整性以及體外受精后的效果。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S826

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本文編號(hào)：2255211