發(fā)布時間：2018-09-18 19:11

【摘要】：環(huán)腺苷酸結(jié)合蛋白H (cAMP-response element binding protein H, CREB-H)是最近鑒定的在肝臟內(nèi)豐富表達的轉(zhuǎn)錄因子,參與調(diào)控肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達。而載脂蛋白C2 (Apolipoprotein C2,ApoCⅡ)作為CREB-H目的調(diào)控基因,可激活脂蛋白脂酶(Lipoprotein Lipase, LPL),參與甘油三酯的分解過程。本研究利用分子生物學(xué)實驗技術(shù),一方面在mRNA和蛋白兩個分子水平上對豬CREB-H基因的分子作用機理進行了初步研究;另一方面對豬ApoCⅡ mRNA表達與豬CREB-H基因和豬脂質(zhì)代謝之間的關(guān)系進行了初步的探討。獲得如下結(jié)果：1.采用實時熒光定量PCR和Western blotting技術(shù)檢測了出生1日齡馬身豬12個組織(心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、胃、小腸、小腦、下丘腦、背最長肌、股二頭肌、腰大肌)中CREB-H基因相對表達豐度,CREB-H mRNA主要在肝臟和小腸中表達,在其他組織也有較少表達;CREB-H蛋白在肝臟組織中的表達量顯著高于其他組織,而在心臟、脾臟、小腦中卻不表達。進一步檢測了馬身豬和大白豬從初生到180日齡7個生長發(fā)育期(1 d、30 d、60 d、 90 d、120 d、150 d和180d)肝臟組織中CREB-H基因mRNA和蛋白質(zhì)相對表達豐度,發(fā)現(xiàn)馬身豬和大白豬肝臟組織中CREB-H基因mRNA或蛋白相對表達豐度均表現(xiàn)出初生時最高,隨日齡的增大,CREB-H mRNA表達呈現(xiàn)周期變化,CREB-H蛋白的表達呈現(xiàn)逐漸下降趨勢。同一日齡,馬身豬CREB-H蛋白的表達量均極顯著高于大白豬(P0.01)。該結(jié)果可為研究豬的脂質(zhì)代謝調(diào)控機制提供一定的理論依據(jù)。2.采用實時熒光定量PCR技術(shù)研究了ApoCⅡ基因在出生1日齡馬身豬12個組織中表達特征和在馬身豬和大白豬中的發(fā)育性表達變化趨勢,結(jié)果發(fā)現(xiàn)ApoCⅡ基因主要在肝臟組織中表達,其mRNA在肝臟組織中的表達具有顯著的日齡依賴性和明顯的品種差異性,且與CREB-H有極顯著的正相關(guān)性(P0.01),其表達可能對豬脂質(zhì)代謝有顯著影響。3.利用cAMP類似物(8Br-cAMP)處理了大白豬傳代肝細胞,之后利用熒光定量PCR檢測了CREB-H和ApoCⅡ的mRNA表達量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著8Br-cAMP濃度的增大,CREB-H和ApoCⅡ表達水平而上升,同時在1 mmol/L 8Br-cAMP誘導(dǎo)下,隨著培養(yǎng)時間的延長,CREB-H和ApoCⅡ均表現(xiàn)為先上升后下降,且兩基因之間存在顯著正相關(guān)(P0.05)。該結(jié)果可進一步揭示CREB-H的表達調(diào)控機制。
[Abstract]:Cyclic adenylate binding protein H (cAMP-response element binding protein H, CREB-H) is a recently identified transcription factor rich in expression in the liver, which is involved in regulating the expression of genes related to lipid metabolism in the liver. Apolipoprotein C2 (Apolipoprotein C2ApoC 鈪，

本文編號：2248843