【摘要】：環(huán)腺苷酸結(jié)合蛋白H (cAMP-response element binding protein H, CREB-H)是最近鑒定的在肝臟內(nèi)豐富表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子,參與調(diào)控肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá)。而載脂蛋白C2 (Apolipoprotein C2,ApoCⅡ)作為CREB-H目的調(diào)控基因,可激活脂蛋白脂酶(Lipoprotein Lipase, LPL),參與甘油三酯的分解過程。本研究利用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù),一方面在mRNA和蛋白兩個(gè)分子水平上對豬CREB-H基因的分子作用機(jī)理進(jìn)行了初步研究;另一方面對豬ApoCⅡ mRNA表達(dá)與豬CREB-H基因和豬脂質(zhì)代謝之間的關(guān)系進(jìn)行了初步的探討。獲得如下結(jié)果：1.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blotting技術(shù)檢測了出生1日齡馬身豬12個(gè)組織(心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、胃、小腸、小腦、下丘腦、背最長肌、股二頭肌、腰大肌)中CREB-H基因相對表達(dá)豐度,CREB-H mRNA主要在肝臟和小腸中表達(dá),在其他組織也有較少表達(dá);CREB-H蛋白在肝臟組織中的表達(dá)量顯著高于其他組織,而在心臟、脾臟、小腦中卻不表達(dá)。進(jìn)一步檢測了馬身豬和大白豬從初生到180日齡7個(gè)生長發(fā)育期(1 d、30 d、60 d、 90 d、120 d、150 d和180d)肝臟組織中CREB-H基因mRNA和蛋白質(zhì)相對表達(dá)豐度,發(fā)現(xiàn)馬身豬和大白豬肝臟組織中CREB-H基因mRNA或蛋白相對表達(dá)豐度均表現(xiàn)出初生時(shí)最高,隨日齡的增大,CREB-H mRNA表達(dá)呈現(xiàn)周期變化,CREB-H蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)逐漸下降趨勢。同一日齡,馬身豬CREB-H蛋白的表達(dá)量均極顯著高于大白豬(P0.01)。該結(jié)果可為研究豬的脂質(zhì)代謝調(diào)控機(jī)制提供一定的理論依據(jù)。2.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究了ApoCⅡ基因在出生1日齡馬身豬12個(gè)組織中表達(dá)特征和在馬身豬和大白豬中的發(fā)育性表達(dá)變化趨勢,結(jié)果發(fā)現(xiàn)ApoCⅡ基因主要在肝臟組織中表達(dá),其mRNA在肝臟組織中的表達(dá)具有顯著的日齡依賴性和明顯的品種差異性,且與CREB-H有極顯著的正相關(guān)性(P0.01),其表達(dá)可能對豬脂質(zhì)代謝有顯著影響。3.利用cAMP類似物(8Br-cAMP)處理了大白豬傳代肝細(xì)胞,之后利用熒光定量PCR檢測了CREB-H和ApoCⅡ的mRNA表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著8Br-cAMP濃度的增大,CREB-H和ApoCⅡ表達(dá)水平而上升,同時(shí)在1 mmol/L 8Br-cAMP誘導(dǎo)下,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長,CREB-H和ApoCⅡ均表現(xiàn)為先上升后下降,且兩基因之間存在顯著正相關(guān)(P0.05)。該結(jié)果可進(jìn)一步揭示CREB-H的表達(dá)調(diào)控機(jī)制。
[Abstract]:Cyclic adenylate binding protein H (cAMP-response element binding protein H, CREB-H) is a recently identified transcription factor rich in expression in the liver, which is involved in regulating the expression of genes related to lipid metabolism in the liver. Apolipoprotein C2 (Apolipoprotein C2ApoC 鈪，

本文編號：2248843