【摘要】：前期研究表明TGF-β1、PDGF-B基因在LPS介導(dǎo)的小鼠乳腺上皮細(xì)胞(MECs)差異顯著的上調(diào),且小鼠MECs在LPS刺激下通過(guò)TLR4信號(hào)通路引起細(xì)胞分泌前炎癥細(xì)胞因子而調(diào)節(jié)免疫和炎癥,為了研究TGF-β1、PDGF-B基因在TLR4信號(hào)通路的作用,本研究采用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)對(duì)TGF-β1和PDGF-B基因進(jìn)行沉默,用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法篩選最佳轉(zhuǎn)染條件,繼續(xù)采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法分別檢測(cè)它們沉默后LPS介導(dǎo)其下游信號(hào)Smad3和PI3K mRNA表達(dá)量,用ELISA方法檢測(cè)其下游信號(hào)Smad3和PI3K蛋白含量,ELISA方法檢測(cè)LPS介導(dǎo)細(xì)胞分泌前炎癥細(xì)胞因子IL-6和TNF-α的量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:選用TGF-β1-mus-1212、PDGF-B-mus-886 siRNA轉(zhuǎn)染片段50 nM、30 nM、20 nM濃度組都能極顯著抑制TGF-β1和PDGF-B的mRNA表達(dá)(P0.01),其中,TGF-β1-mus-1212片段、PDGF-B-mus-886片段的50 nM濃度下各轉(zhuǎn)染抑制率分別最高。TGF-β1沉默后,LPS刺激下其下游信號(hào)Smad3mRNA表達(dá)量和細(xì)胞分泌量與LPS對(duì)照組相比呈顯著性降低(P0.05),細(xì)胞分泌TNF-α的量比LPS對(duì)照組顯著降低(P0.05),分泌IL-6的量各組無(wú)變化(P0.05)。PDGF-B沉默后,LPS刺激下其下游PI3K的mRNA表達(dá)量與LPS對(duì)照組相比呈顯著性降低(P0.05),PI3K蛋白含量與LPS對(duì)照組相比有所降低,但差異不顯著(P0.05),細(xì)胞分泌IL-6的量與LPS對(duì)照組相比呈顯著性降低(P0.05),分泌TNF-α的量各組無(wú)變化(P0.05)。結(jié)果提示:采用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)成功對(duì)TGF-β1、PDGF-B基因沉默;小鼠MECs中TGF-β1與Smad3有直接關(guān)系,TGF-β1能引起LPS介導(dǎo)的其下游信號(hào)Smad3表達(dá)和前炎癥因子的分泌,它可能是小鼠MECs上TLR4信號(hào)通路中的關(guān)鍵基因;PDGF-B與PI3K有一定關(guān)系,PDGF-B可引起LPS介導(dǎo)的其下游信號(hào)PI3K表達(dá)和前炎癥因子的分泌,但PI3K激活可能還有其他途徑,PDGF-B可能是小鼠MECs上TLR4信號(hào)通路中的關(guān)鍵基因。因此,TGF-β1和PDGF-B基因可以作為靶基因進(jìn)行更加深入的研究,能為乳腺炎癥、腫瘤等乳腺相關(guān)疾病的治療提供新的思路及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),為新藥的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供理論依據(jù)。
[Abstract]:Previous studies showed that TGF- 尾 1 PDGF-B gene was significantly up-regulated in (MECs) of mouse mammary epithelial cells mediated by LPS, and that mouse MECs stimulated by LPS induced the secretion of preinflammatory cytokines through TLR4 signaling pathway to regulate immunity and inflammation. In order to study the role of TGF- 尾 1 and PDGF-B gene in TLR4 signaling pathway, siRNA transfection technique was used to silence TGF- 尾 1 and PDGF-B genes, and real-time fluorescence quantitative RT-PCR was used to screen the optimal transfection conditions. Real-time fluorescence quantitative RT-PCR was used to detect the expression of Smad3 and PI3K mRNA in their downstream signal mediated by LPS after their silencing, respectively. The content of Smad3 and PI3K protein in downstream signal was detected by ELISA method and the quantity of IL-6 and TNF- 偽 secreted by LPS mediated cells was detected by Elisa. The results showed that TGF- 尾 1-mus-1212 PDGF-B-mus-886 siRNA transfection fragment 50 nM,30 nM,20 nM could significantly inhibit the mRNA expression of TGF- 尾 1 and PDGF-B (P0.01). The inhibitory rates of 50 nM on the transfection of TGF- 尾 1-mus-1212 PDGF-B-mus-886 fragment were the highest under the stimulation of TGF- 尾 1 and PDGF-B after the silencing of TGF- 尾 1. TGF- 尾 1-mus-1212 fragment and PDGF-B-mus-886 fragment of PDGF-B-mus-886, respectively. The expression of downstream signal Smad3mRNA and cell secretion were significantly lower than those of LPS control group (P0.05), the amount of TNF- 偽 secreted by cells was significantly lower than that of LPS control group (P0.05), and the amount of IL-6 secreted in each group had no change (P0.05). The mRNA table of downstream PI3K stimulated by PDGF-B silencing was significantly lower than that of LPS control group (P0.05). The content of PI3K in LPS group was significantly lower than that in control group (P0.05), and the protein content of PI3K was lower than that of LPS control group. But the difference was not significant (P0.05), the amount of IL-6 secreted by cells was significantly lower than that of LPS control group (P0.05), the amount of secreting TNF- 偽 did not change in each group (P0.05). The results suggested that TGF- 尾 1 PDGF-B gene was silenced successfully by siRNA transfection technique, and that TGF- 尾 1 in mouse MECs was directly related to Smad3, and TGF- 尾 1 could induce LPS mediated Smad3 expression and proinflammatory factor secretion. It may be that PDGF-B is a key gene in the TLR4 signaling pathway of mouse MECs. PDGF-B may induce the expression of PI3K and the secretion of proinflammatory factors mediated by LPS. However, there may be other pathways to PI3K activation. PDGF-B may be a key gene in the TLR4 signaling pathway of mouse MECs. Therefore, TGF- 尾 1 and PDGF-B genes can be used as target genes for further research, which can provide new ideas and experimental data for the treatment of breast inflammation, tumor and other mammary gland related diseases, and provide theoretical basis for the development and application of new drugs.
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.3

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 白艷;劉云章;;受體酪氨酸激酶Ror在Wnt信號(hào)通路中的功能研究進(jìn)展[J];河北農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年07期

2 韓琳;馮新港;;Wnt信號(hào)通路及其在動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的作用[J];中國(guó)獸醫(yī)寄生蟲(chóng)病;2008年03期

3 宋舟;張立艷;董海兵;白換力;陳偉;吳帥成;伊鵬霏;付本懂;申海清;韋旭斌;;JAK-STAT信號(hào)通路研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2012年06期

4 王少兵;陶顯娣;楊靖東;季慕寅;徐銀學(xué);;Wnt信號(hào)通路在哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育中的作用[J];蕪湖職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào);2012年04期

5 李聰;馬凱麗;劉增力;王志鋼;;IGFs及其信號(hào)通路研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2013年09期

6 劉榮雕;阮靈偉;;PI3K-Akt信號(hào)通路與病毒感染[J];生物技術(shù)通報(bào);2013年06期

7 李桂蘭;楊洪雙;張麗;;SWH信號(hào)通路生長(zhǎng)控制作用研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年07期

8 趙靜;張春雷;房興堂;陳宏;;WNT信號(hào)通路的研究進(jìn)展[J];中國(guó)牛業(yè)科學(xué);2012年01期

9 李鵬;夏平安;宋詠梅;趙桂蘋(píng);;雞Toll樣受體4信號(hào)通路及在雞沙門菌抗病研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J];中國(guó)家禽;2009年15期

10 滕英娟;孫春光;;PI3K/Akt及MAPK/Erk1/2信號(hào)通路在病毒感染中的作用[J];鄭州牧業(yè)工程高等�？茖W(xué)校學(xué)報(bào);2012年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 程華;王文;;經(jīng)典Wnt信號(hào)通路抑制劑[A];2011全國(guó)老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

2 蔣瑩;程華;張麗;艾厚喜;王文;;經(jīng)典Wnt信號(hào)通路抑制劑[A];第一屆全國(guó)麻醉藥理專業(yè)委員會(huì)第二次學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

3 蔣瑩;程華;張麗;艾厚喜;王文;;經(jīng)典Wnt信號(hào)通路抑制劑[A];中國(guó)成人醫(yī)藥教育論壇（4）[C];2011年

4 蔣瑩;程華;張麗;艾厚喜;王文;;經(jīng)典Wnt信號(hào)通路抑制劑[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)補(bǔ)益藥藥理專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)暨人參及補(bǔ)益藥學(xué)術(shù)研討會(huì)會(huì)議論文集[C];2011年

5 李艷菲;艾厚喜;孫芳玲;張麗;蔣瑩;王文;;Wnt信號(hào)通路研究新進(jìn)展[A];2013年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十三屆中國(guó)藥師周論文集[C];2013年

6 李艷菲;艾厚喜;孫芳玲;張麗;蔣瑩;王文;;Wnt信號(hào)通路研究新進(jìn)展[A];2013年全國(guó)老年性癡呆與相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

7 李艷菲;艾厚喜;孫芳玲;張麗;蔣瑩;王文;;Wnt信號(hào)通路研究新進(jìn)展[A];第三屆中國(guó)藥理學(xué)會(huì)補(bǔ)益藥藥理專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

8 季宇彬;胡哲清;鄒翔;;MAPK信號(hào)通路及其研究進(jìn)展[A];轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研討會(huì)論文集[C];2010年

9 程華;孫芳玲;艾厚喜;張麗;蔣瑩;王文;;Wnt信號(hào)通路與血管發(fā)生[A];全國(guó)第三次麻醉藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

10 李林;;利用小分子探針研究經(jīng)典Wnt信號(hào)通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第十一次會(huì)員代表大會(huì)暨2014年全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集——專題報(bào)告七[C];2014年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前6條

1 劉海英;美發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞信號(hào)通路互動(dòng)機(jī)制[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

2 記者 劉海英;英發(fā)現(xiàn)細(xì)胞信號(hào)通路新“剎車”蛋白[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

3 衣曉峰　陳英云 記者 李麗云;結(jié)腸癌發(fā)生中新的信號(hào)通路找到[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

4 記者 許琦敏;減肥信號(hào)受控于腦中“通訊員”[N];文匯報(bào);2008年

5 記者 劉海英;一種蛋白決定人的抗壓能力[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

6 通訊員 喬蕤琳 記者 衣曉峰 聶松義;癌癥中小分子和微小核苷酸有關(guān)聯(lián)[N];健康報(bào);2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王森;乙型肝炎病毒表面抗原抑制TLR2和TLR4信號(hào)通路的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 尚果果;NRF2抗氧化應(yīng)激信號(hào)通路的活化在糖尿病腎病中的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 孫鼎琪;Akt信號(hào)通路在膀胱腫瘤的進(jìn)展及化療敏感性的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

4 白秀峰;新基因Gsdma3對(duì)小鼠毛囊周期及Wnt/β-catenin信號(hào)通路作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 張俊波;PI3K/Akt信號(hào)通路調(diào)控胞內(nèi)布魯氏菌16M存活的分子機(jī)制研究[D];石河子大學(xué);2014年

6 成旭東;黃芪活性物質(zhì)篩選及基于PKC-ERK信號(hào)通路抑制肺癌的作用機(jī)理研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 路康;STAT3信號(hào)通路介導(dǎo)CLL和MCL發(fā)生組蛋白去乙酰化酶抑制劑耐藥的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

8 趙睿;Wnt信號(hào)通路在臂叢神經(jīng)根性撕脫傷誘發(fā)的神經(jīng)病理性痛中的作用機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 劉海燕;Sonic hedgehog信號(hào)通路對(duì)正常角質(zhì)形成細(xì)胞增殖及凋亡的影響及其分子機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 祁義軍;胃腸道間質(zhì)瘤中Shh信號(hào)通路作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李玉娟;Hedgehog信號(hào)通路在大鼠急性胰腺炎中的作用及其對(duì)TNF-α、IL-10的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 趙玲玲;FLCN與PAT1相互作用調(diào)控mTORC1信號(hào)通路的機(jī)理研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

3 程志芬;Hedgehog信號(hào)通路相關(guān)因子在TCA舌癌細(xì)胞株中的表達(dá)及其意義[D];延邊大學(xué);2013年

4 陳丹丹;Neurexin通過(guò)Gbb信號(hào)通路調(diào)控果蠅神經(jīng)肌肉接頭突觸生長(zhǎng)[D];東南大學(xué);2015年

5 馬會(huì)彥;胃癌中HSulf-1與Hedgehog信號(hào)通路的關(guān)系研究[D];浙江理工大學(xué);2011年

6 胡磊;Cdc25A抑制RIG-Ⅰ介導(dǎo)的信號(hào)通路機(jī)制研究[D];安徽大學(xué);2014年

7 楊鑫娜;NOTCH信號(hào)通路在慢性阻塞性肺疾病免疫失衡中的作用及機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2015年

8 劉寧;酰基四氫-β-咔啉類化合物通過(guò)靶向USP15進(jìn)而調(diào)控TGFβ信號(hào)通路活性的結(jié)構(gòu)優(yōu)化與探究[D];華東師范大學(xué);2015年

9 楊明;TLR3/TRIF信號(hào)通路在帕金森病模型炎癥反應(yīng)中的作用及機(jī)制研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2016年

10 周杰;黑米花青素通過(guò)FAK信號(hào)通路抗HER-2陽(yáng)性乳腺癌轉(zhuǎn)移及EMT效應(yīng)的體外研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2016年

，

本文編號(hào)：2223545