【摘要】：IFN-γ是雞體內(nèi)一種重要的細(xì)胞因子,為制備雞IFN-γ的單克隆抗體,以ch IFN-γ-His融合蛋白免疫BALB/c小鼠,經(jīng)3次免疫后分離出脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞系(SP2/0)進(jìn)行融合,經(jīng)單克隆培養(yǎng),篩選得到4株能穩(wěn)定分泌單抗的雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為2A10、2B10、4D10和4F9。應(yīng)用間接ELISA方法鑒定4株單抗的重鏈類型分別為IgG2a、IgG1、IgG1和IgG2b。通過間接ELISA方法測(cè)定4株單抗的親和力解離常數(shù)(Kd)分別為1.06×10~(-10)、7.35×10`(-10)、1.10×10~(-10)和9.34×10~(-10),表明4株單抗均為高親和力抗體。將ch IFN-γ的C端、N端同時(shí)進(jìn)行表達(dá),應(yīng)用Western-blot方法鑒定4株單抗的抗原識(shí)別表位分別為chIFN-γ的47-100位氨基酸,101-145位氨基酸和1-46位氨基酸。應(yīng)用Western-blot方法鑒定4株單抗的特異性,4株單抗均能識(shí)別原核表達(dá)的重組蛋白chIFN-γ,而不識(shí)別雞ch IL-2、ch IL-4、ch IL-10蛋白,表明4株單抗特異性良好。原核表達(dá)chIFN-γ蛋白制備單克隆抗體效果良好,為進(jìn)一步研究chIFN-γ的功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:IFN- 緯 is an important cytokine in chicken. In order to prepare monoclonal antibody to chicken IFN- 緯, BALB/c mice were immunized with ch IFN- 緯 -His fusion protein. Spleen cells were isolated and fused with myeloma cell line (SP2/0) after three times of immunization. Four hybridoma cell lines with stable secretion of monoclonal antibodies were selected and named 2A10B10D10 and 4F9, respectively. Identification of heavy chain types of four McAbs by indirect ELISA method: IgG2a,IgG1,IgG1 and IgG2b. The affinity dissociation constant (Kd) of the four McAbs determined by indirect ELISA was 1.06 脳 10 ~ (-10), 7.35 脳 10 ~ (-10) and 9.34 脳 10 ~ (-10), respectively. The results showed that the four McAbs were high affinity antibodies. The C-terminal N-terminal of ch IFN- 緯 was expressed at the same time. The antigen-recognition epitopes of four McAbs were identified as 101-145 amino acids and 1-46 amino acids of chIFN- 緯, respectively. Western-blot method was used to identify the specific McAbs of the four strains. All the McAbs could recognize the prokaryotic expressed recombinant protein chIFN- 緯, but not the chicken ch IL-2,ch IL-4,ch IL-10 protein. The results showed that the four McAbs had good specificity. The prokaryotic expression of chIFN- 緯 protein had a good effect on the preparation of monoclonal antibody, which laid a foundation for the further study of the function of chIFN- 緯.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31272543;31430085) 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(NYCYTX-41)
【分類號(hào)】：S831

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本文編號(hào)：2223104