【摘要】：旨在對(duì)重慶地區(qū)山羊體表型淋巴結(jié)炎病原菌進(jìn)行分離鑒定,并建立相應(yīng)檢測(cè)方法。無(wú)菌采集山羊患病部位膿液,進(jìn)行病原菌分離鑒定,依據(jù)菌株16SRNA基因序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育樹(shù),同時(shí)設(shè)計(jì)特異性引物,建立PCR檢測(cè)方法。結(jié)果表明,從病料中主要分離到3種病原菌,分別為偽結(jié)核棒狀桿菌、化膿隱秘桿菌和金黃色葡萄球菌;依據(jù)偽結(jié)核棒狀桿菌磷脂酶D、化膿隱秘桿菌16SRNA和金黃色葡萄球菌nuc保守核苷酸序列設(shè)計(jì)引物,建立的多重PCR檢測(cè)方法,可以從3種菌株混合基因組中擴(kuò)增出大小分別為507、1 378和278bp的對(duì)應(yīng)菌株特異性序列,該方法最低檢出濃度為103cfu·mL-1;對(duì)采集的80份臨床樣品進(jìn)行多重PCR檢測(cè),發(fā)現(xiàn)偽結(jié)核棒狀桿菌與金黃色葡萄球菌混合感染檢出率為12.5%,偽結(jié)核棒狀桿菌與化膿隱秘桿菌混合感染檢出率為3.75%,三種菌混合感染檢出率為7.5%。成功分離到山羊淋巴結(jié)炎的3種主要病原菌,并建立多重PCR檢測(cè)方法,為該病的防控及治病機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The aim of this study was to isolate and identify the pathogenic bacteria of goat body surface lymphadenitis in Chongqing area and to establish a corresponding detection method. The pathogenic bacteria were isolated and identified from the abscess collected from the diseased part of goat. The phylogenetic tree was constructed according to the 16SRNA gene sequence of the strain. At the same time, specific primers were designed to establish the detection method of PCR. The results showed that three kinds of pathogenic bacteria were mainly isolated from the diseased materials, which were Corynebacterium pseudotuberculosis, Stereobacterium pyogenes and Staphylococcus aureus. The primers were designed according to the phospholipase D of Corynebacterium pseudotuberculosis, the conserved nucleotide sequence of 16SRNA and nuc of Staphylococcus aureus, and the multiplex PCR detection method was established. The specific sequences of the corresponding strains were amplified from the mixed genomes of the three strains, and the corresponding specific sequences were obtained, respectively. The lowest detection concentration of this method was 103cfu mL-1; for multiple PCR detection of 80 clinical samples. It was found that the detection rate of mixed infection of Corynebacterium pseudotuberculosis and Staphylococcus aureus was 12.5, the detection rate of mixed infection of Corynebacterium pseudotuberculosis and Mycobacterium pyogenes was 3.75, the detection rate of mixed infection of three kinds of bacteria was 7.5%. Three major pathogens of goat lymphadenitis were successfully isolated and a multiplex PCR detection method was established, which laid a foundation for the study of the prevention and control of the disease and the mechanism of its treatment.
【作者單位】： 重慶市畜牧科學(xué)院;重慶市畜牧科學(xué)院武陵分院;
【基金】：重慶市基礎(chǔ)與前沿研究計(jì)劃項(xiàng)目(cstc2015jcyjA80035) 國(guó)家自然科學(xué)基金(31402149)
【分類號(hào)】：S858.27

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本文編號(hào)：2221212