【摘要】：本研究旨在建立一種簡(jiǎn)便有效的豬胎盤絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞體外分離純化方法。采用胰酶DNase I酶聯(lián)合消化法消化母豬自然分娩后胎盤絨毛組織,以35%、45%2個(gè)Percoll密度梯度法進(jìn)行豬胎盤絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞的分離純化,并通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)、測(cè)定生長(zhǎng)曲線、免疫熒光染色、透射電鏡等鑒定豬胎盤絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞。結(jié)果表明,分離培養(yǎng)的豬胎盤絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞呈上皮樣平鋪成片生長(zhǎng),形態(tài)為多角形或類圓形,培養(yǎng)48h后部分細(xì)胞開(kāi)始融合成多核合胞體滋養(yǎng)層細(xì)胞。免疫熒光染色結(jié)果顯示,細(xì)胞角蛋白7染色陽(yáng)性占91%以上,表明分離獲得的豬胎盤絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞純度較高。透射電鏡觀察顯示,所獲細(xì)胞具有典型滋養(yǎng)層細(xì)胞結(jié)構(gòu)特征。綜上表明,采用胰酶DNase I酶聯(lián)合消化法和35%、45%2個(gè)Percoll密度梯度法進(jìn)行分離純化,可簡(jiǎn)便有效地獲得較高純度的豬胎盤絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞。
[Abstract]:The aim of this study was to establish a simple and effective method for isolation and purification of porcine placental villus trophoblastic cells in vitro. Placental villi of sows were digested with trypsin DNase I enzyme and digested. Two Percoll density gradient methods were used to isolate and purify placental villus trophoblastic cells from porcine placenta. Cell morphology was observed and growth curve was measured. Porcine placental villus trophoblastic cells were identified by immunofluorescence staining and transmission electron microscopy. The results showed that the cultured porcine placental villus trophoblastic cells grew as epithelioid lamina and were polygonal or round in shape. After 48 hours of culture, some of the cells began to fuse into polynuclear syncytiotrophoblastic cells. The results of immunofluorescence staining showed that cytokeratin 7 was positive in more than 91%, indicating that the purity of the isolated porcine placental villus trophoblastic cells was high. Transmission electron microscopy (TEM) showed that the cells were characterized by typical trophoblast cells. The results showed that high purity of porcine placental villus trophoblastic cells could be obtained by using trypsin DNase I enzyme digestion method and Percoll density gradient method.
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【基金】：江蘇省自然科學(xué)基金-青年基金項(xiàng)目(BK20150672)
【分類號(hào)】：S828

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本文編號(hào)：2176916