【摘要】：microRNA(miRNA)是一種重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的非編碼RNA,很多miRNAs參與了哺乳動(dòng)物乳腺發(fā)育和泌乳等過程。miRNA通過與其靶基因mRNA的3′端非編碼區(qū)域(3-untranslated region,3′UTR)互補(bǔ)配對,導(dǎo)致沉默復(fù)合體降解mRNA或阻礙其翻譯。研究表明,STAT5A、PRLR、PRL、GHR基因在調(diào)控乳腺泌乳信號通路方面具有重要作用,因此,本研究的目的是探究STAT5A、PRLR、PRL、GHR基因的相關(guān)miRNAs,為揭示miRNA調(diào)控奶牛的泌乳機(jī)理奠定基礎(chǔ)。通過targetScan6.0軟件預(yù)測和分析了STAT5A、PRLR、PRL、GHR基因3’UTR潛在的miRNAs,分別是miRNA2895和miRNA2446(STAT5A)、miR-2393(PRL)、miR-135b(PRLR)、mi R-101(GHR)。通過構(gòu)建STAT5A、PRLR、PRL、GHR基因的psi-check2雙熒光素酶報(bào)告載體和pcDNA3.1表達(dá)載體,共同轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞,并與空白對照組進(jìn)行對比。40 h后將細(xì)胞消化,然后在酶標(biāo)儀上檢測雙熒光素酶的活性,結(jié)果表明psi-check2-STAT5A3’UTR、psi-check2-PRLR3’UTR、psi-check2-GHR3’UTR的螢火蟲熒光素酶活性與海腎熒光素酶活性的比值均有所提高,與對照組相比差異顯著(P0.05),表明miR-2895和mi R-2446在載體水平上對STAT5A可能有調(diào)控作用;mi R-135b對PRLR、miR-101對GHR基因可能有調(diào)控作用;psi-check2-PRL3’UTR的螢火蟲熒光素酶活性與海腎熒光素酶的比值變化不顯著,差異不顯著(P0.05),表明miR-2393對PRL基因的調(diào)控作用不顯著。
[Abstract]:MicroRNA (miRNA) is an important post-transcriptional non-coding RNA.Many of miRNAs are involved in mammary gland development and lactation in mammals. MiRNAs are paired with the 3-untranslated region 3'noncoding region of its target gene mRNA. The silencing complex leads to the degradation of mRNA or hinders its translation. The results showed that the gene of STAT5A5APRLRGHR plays an important role in the regulation of breast lactation signaling pathway. Therefore, the purpose of this study is to explore the related miRNAs-related genes of STAT5A5A PRLRRGHR gene, so as to lay a foundation for revealing the mechanism of miRNA regulating dairy cows' lactation. The potential miRNAss of the 3'UTR of STAT5Agna PRLRGHR gene are predicted and analyzed by targetScan6.0 software, which are miRNA2895 and miRNA2446 (STAT5A) / miR-2393 (PRL) / miR-135b (PRLR) / mi R-101 (GHR)., respectively. The psi-check2 double luciferase report vector and pcDNA3.1 expression vector of STAT5Agna PRLRGHR gene were constructed and transfected into HEK293T cells. The cells were digested after 40 h compared with the blank control group, and the activity of double luciferase was detected by enzyme labeling instrument. The results showed that the ratio of luciferase activity to luciferase activity in psi-check2-STAT5A3 UTR-psi-check2-PRLR3 UTR-psi-check2-GHR3 UTR was increased, and the ratio of luciferase activity to luciferase activity in sea kidney was increased. Compared with the control group, the difference was significant (P0.05), which indicated that miR-2895 and mi R-2446 might regulate STAT5A at vector level. The ratio of luciferase activity to luciferase of sea kidney luciferase was not significantly different from that of psi-check2-PRL3-UTR, which indicated that mi R-135b could regulate GHR gene. The difference was not significant (P0.05), indicating that the regulation of PRL gene by miR-2393 was not significant.
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S823

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本文編號：2175361