【摘要】：以含有全長(zhǎng)H9N2亞型AIV M2基因的質(zhì)粒為模板,經(jīng)PCR擴(kuò)增得到M2e基因;利用BglⅡ和BamHⅠ之間互為同尾酶關(guān)系,構(gòu)建順次連接的多拷貝體M2e,并連接入原核表達(dá)載體pGEX-6p-1,構(gòu)成2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重組質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)化至表達(dá)宿主菌中;將測(cè)序正確的菌液經(jīng)不同濃度IPTG進(jìn)行誘導(dǎo),SDS-PAGE電泳鑒定重組蛋白大小,對(duì)蛋白進(jìn)行可溶性分析;利用Western blot分析5種重組蛋白的反應(yīng)原性。結(jié)果顯示,在37℃下,2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重組蛋白分別經(jīng)終濃度為0.25、0.25、0.5、0.25、0.75mmol/L的IPTG誘導(dǎo)4h時(shí),表達(dá)量最高;2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2e-pGEX重組蛋白大小分別為31.7、37.2、42.7、48.2、53.9ku;對(duì)重組蛋白進(jìn)行可溶性分析顯示,5種重組蛋白均以包涵體形式存在;Western blot分析顯示,2M2e-pGEX、4M2e-pGEX、6M2e-pGEX、8M2e-pGEX和10M2epGEX重組蛋白與鼠抗GST標(biāo)簽的單克隆抗體具有良好的特異性反應(yīng),為后期進(jìn)一步獲得高免疫原性蛋白和篩選具有通用免疫原性的重組蛋白奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:The M2e gene was amplified by PCR using the plasmid containing the full-length H9N2 subtype AIV M2 gene as template, and the cotail enzyme relationship between Bgl 鈪，

本文編號(hào)：2174661