發(fā)布時(shí)間：2018-08-07 08:44

【摘要】：根椐Gen Bank中登錄的豬弓形蟲(chóng)和附紅細(xì)胞體核苷酸序列,分別設(shè)計(jì)2對(duì)引物,在建立各病原單項(xiàng)PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上,優(yōu)化雙重PCR反應(yīng)條件,建立了2種病原的雙重PCR檢測(cè)方法,用這2對(duì)引物對(duì)同一樣品中的弓形蟲(chóng)和附紅細(xì)胞體核酸模板進(jìn)行雙重PCR擴(kuò)增,結(jié)果可同時(shí)擴(kuò)增弓形蟲(chóng)的241 bp,附紅細(xì)胞體的748 bp的特異性片段,而對(duì)其它5份豬病原及對(duì)照的PCR擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。敏感性測(cè)定結(jié)果表明,該雙重PCR技術(shù)能檢出0.1 pg的弓形蟲(chóng)和0.1 pg的附紅細(xì)胞體模板。用72份臨床病料對(duì)此研究雙重PCR技術(shù)和單項(xiàng)PCR技術(shù)進(jìn)行對(duì)比驗(yàn)證,結(jié)果顯示,兩者總符合率為100%。表明建立的雙重PCR檢測(cè)方法具有特異、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn),可用于對(duì)這兩種病原的同時(shí)檢測(cè)和鑒別診斷。
[Abstract]:According to the nucleotide sequences of Toxoplasma gondii and Eperythrozoon entered in Gen Bank, two pairs of primers were designed. On the basis of establishing the single PCR technique of each pathogen, the conditions of double PCR reaction were optimized, and the double PCR detection methods of two pathogens were established. Two pairs of primers were used to amplify the template of Toxoplasma gondii and Eperythrozoon nucleic acid in the same sample. The results showed that the specific fragment of 241bp of Toxoplasma gondii and 748bp of Eperythrozoon could be amplified simultaneously. The results of PCR amplification for the other 5 pig pathogens and the control were negative. The sensitivity test showed that the double PCR technique could detect 0.1 PG Toxoplasma gondii and 0.1 PG Eperythrozoon template. The double PCR technique and single PCR technique were compared and verified with 72 clinical samples. The results showed that the total coincidence rate was 100%. The results showed that the dual PCR detection method was specific, rapid and accurate, and could be used for simultaneous detection and differential diagnosis of the two pathogens.
【作者單位】： 山東綠都生物科技有限公司;山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院;
【基金】：山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(SDAIT-08-17)
【分類(lèi)號(hào)】：S858.28

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