【摘要】：選擇產(chǎn)氣莢膜梭菌壞死性腸炎毒素B(NetB)為抗原,構(gòu)建產(chǎn)氣莢膜梭菌NetB毒素基因重組植物乳酸桿菌,利用植物乳酸桿菌穿梭載體pSIP409構(gòu)建重組質(zhì)粒pSIP409-NetB,經(jīng)雙酶切鑒定和序列測定正確后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞并進行SppIP誘導(dǎo)表達。Western blot證明重組蛋白表達成功,并且主要以包涵體形式存在,NetB重組蛋白相對分子質(zhì)量為36 ku。重組質(zhì)粒pSIP409-NetB電轉(zhuǎn)化植物乳酸桿菌NC8細(xì)胞,PCR和雙酶切鑒定正確后進行SppIP誘導(dǎo)表達。Western Blot和間接免疫熒光鑒定表明構(gòu)建的重組植物乳酸桿菌具有誘導(dǎo)分泌NetB蛋白的能力,可作為黏膜免疫的候選抗原。
[Abstract]:The recombinant plasmids of Clostridium perfringens necrotizing enterocolitis B (NetB) were selected as antigen to construct the recombinant plant lactobacillus in the recombinant plant of Clostridium perfringens NetB toxin gene, and the recombinant plasmid pSIP409-NetB was constructed by the shuttle carrier pSIP409 of plant lactobacillus plantarum. After the identification and sequencing of double enzyme digestion and sequence determination, the BL21 (DE3) receptive cells of Escherichia coli were converted to SppIP. The expression of.Western blot showed that the recombinant protein was expressed successfully, and the recombinant protein was mainly in the form of inclusion body. The relative molecular mass of NetB recombinant protein was 36 ku. recombinant plasmid pSIP409-NetB electroporation of Lactobacillus NC8 cells. PCR and double enzyme digestion were correctly identified by SppIP induction table to.Western Blot and indirect immunofluorescence identification. The recombinant Lactobacillus plantarum has the ability to induce the secretion of NetB protein and can be used as a candidate antigen for mucosal immunity.
【作者單位】： 黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所;東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;
【分類號】：S852.61

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本文編號：2156026