【摘要】：基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)為我國NDV的主要流行病毒株,而經(jīng)典疫苗株LaSota不能對雞群起到有效的免疫保護。為研發(fā)針對NDV基因Ⅶ型流行病毒株的疫苗,本研究采用反向遺傳操作技術,將LaSota的F基因編碼區(qū)(CDS)替換為基因Ⅶ型流行病毒株CK/CH/LHLJ/1/06株的F基因CDS,并將替換后的F蛋白的裂解位點突變?yōu)長aSota的裂解位點,構建重組質粒pNDFLsp-mF。將pNDFLsp-mF與表達NP、P和L蛋白的輔助質粒共轉染BSR-T7/5細胞,拯救獲得表達基因Ⅶ型NDV F蛋白的重組病毒(rLaSota-mF)。生長曲線結果顯示,與LaSota相似,rLaSota-mF能夠在雞胚中有效復制,病毒滴度EID50為109.375/0.1 mL。生物學特性測定結果顯示rLaSota-mF的MDT為144.6 h,表明其為低毒力病毒株。將拯救獲得的病毒連續(xù)傳15代后所替換的基因及突變的位點能夠在r LaSota-mF中穩(wěn)定存在。本研究為研究與開發(fā)針對NDV不同基因型流行病毒株的疫苗奠定基礎。
[Abstract]:The gene VII type Newcastle disease virus (NDV) is the main epidemic virus strain of NDV in China, and the classic vaccine strain LaSota can not provide effective immune protection to the chickens. In order to develop a vaccine against the NDV gene VII virus strain, the reverse genetic manipulation technique is used to replace the F gene encoding region of LaSota (CDS) as a gene VII virus. The F gene CDS of the strain CK/CH/LHLJ/1/06 strain and the splitting site of the replacement F protein were mutated to the cracking site of LaSota, and the recombinant plasmid pNDFLsp-mF. was constructed to co transfect pNDFLsp-mF with NP, P and L proteins to co transfect BSR-T7/5 cells, and to save the recombinant virus of the expressed gene type VII NDV protein. The results showed that, similar to LaSota, rLaSota-mF could be effectively replicated in the chicken embryo, the virus titer EID50 was 109.375/0.1 mL. biological characteristics and the MDT of rLaSota-mF was 144.6 h, indicating that it was a low virulence virus strain. This study laid the foundation for research and development of vaccines for different genotypes of NDV.
【作者單位】： 中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術國家重點實驗室/禽呼吸道病創(chuàng)新團隊;山東省壽光市畜牧獸醫(yī)局;
【基金】：國家公益性行業(yè)(農業(yè))科研專項(201303033) 國家自然科學基金(31502088)
【分類號】：S852.65

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