【摘要】：我國(guó)奶業(yè)發(fā)展水平與發(fā)達(dá)國(guó)家存在著較大差距,尤其是乳脂、乳蛋白均低于美國(guó)、加拿大等發(fā)達(dá)國(guó)家。奶牛飼料資源的差異是限制我國(guó)奶業(yè)發(fā)展的重要因素。我國(guó)農(nóng)作物秸稈資源十分豐富,奶牛飼養(yǎng)中主要粗飼料是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較低的作物秸稈,主要為玉米秸稈。目前報(bào)道,在能量一致的情況下,秸桿和苜蓿分別作為粗飼料的配方可引起奶牛血液中部分氨基酸顯著差異,而氨基酸對(duì)細(xì)胞因子的產(chǎn)生具有調(diào)節(jié)作用。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)飼喂秸稈下奶牛牛乳及血液中TGF-β1和IFN-γ水平高于飼喂苜蓿干草組奶牛,且TGF-β1濃度與乳脂乳蛋白率呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。因此,探討秸桿日糧飼喂下血液中差異氨基酸與TGF-β1和IFN-γ分泌的關(guān)系,以及TGF-β1對(duì)乳腺纖維化和抗感染的影響,將有助于秸桿的科學(xué)利用及乳腺感染的合理防控,提高養(yǎng)殖效益。本課題開展以下三方面工作:第一,尾靜脈采集健康奶牛血液,利用密度梯度離心法分離牛外周血PBMC細(xì)胞,分析兩種不同粗日糧模式下血液中差異較大的氨基酸對(duì)牛外周血PBMC細(xì)胞分泌TGF-β1和IFN-γ的影響,并采用流式細(xì)胞術(shù)分選出TGF-β1陽(yáng)性細(xì)胞,利用PCR方法初步篩選鑒定分泌TGF-β1的細(xì)胞類別。結(jié)果顯示:10種氨基酸作用牛PBMC后,賴氨酸、精氨酸、甘氨酸及蛋氨酸可顯著促進(jìn)TGF-β1的分泌(p0.05)。亮氨酸、精氨酸及蛋氨酸可顯著促進(jìn)PBMC對(duì)IFN-γ的分泌(p0.05)。其它氨基酸無(wú)顯著作用(p0.05)。經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定并分選,精氨酸刺激后TGF-β1陽(yáng)性細(xì)胞占PBMCs的24.98%。進(jìn)一步PCR鑒定分選出的主要細(xì)胞類型有單核細(xì)胞、CD4 T細(xì)胞及WC1γδT細(xì)胞。第二,TGF-β1是重要的促纖維化因子,因此試圖探討TGF-β1對(duì)奶牛乳腺成纖維細(xì)胞的影響,并進(jìn)一步在小鼠乳腺上進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示:TGF-β1通過(guò)ERK1/2信號(hào)通路顯著促進(jìn)奶牛乳腺成纖維細(xì)胞外基質(zhì)α-SMA和I Collagen表達(dá)(p0.05),添加PD98059后顯著抑制了α-SMA和I Collagen表達(dá)(p0.05);在小鼠乳腺組織上也得到了同樣的結(jié)果,TGF-β1顯著促進(jìn)乳腺組織纖維化標(biāo)志α-SMA和I Collagen的表達(dá)(p0.05),加入PD98059作用后有效抑制了小鼠乳腺纖維化標(biāo)志蛋白的表達(dá)(p0.05)。第三,為確定較高水平的TGF-β1在乳腺炎發(fā)病過(guò)程中的作用,我們研究了TGF-β1對(duì)金黃色葡萄球菌感染奶牛乳腺成纖維細(xì)胞的影響。結(jié)果顯示:TGF-β1作用于奶牛乳腺成纖維細(xì)胞12 h后顯著的促進(jìn)了金黃色葡萄球菌的粘附、侵襲作用(p0.05),并促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生凋亡。綜上所述:本研究闡明血液中差異氨基酸水平與高水平TGF-β1和IFN-γ密切相關(guān),并初步鑒定牛單核細(xì)胞、CD4 T細(xì)胞及γδT細(xì)胞參與了TGF-β1的合成及分泌。血液中長(zhǎng)期高水平TGF-β1可以促進(jìn)奶牛乳腺成纖維細(xì)胞纖維化的發(fā)生,并促進(jìn)小鼠乳腺組織纖維化的發(fā)生和結(jié)構(gòu)的改變,加劇金黃色葡萄球菌粘附、侵襲成纖維細(xì)胞,促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。本研究不但為深入探索乳腺炎發(fā)病機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ),也有助于秸桿的科學(xué)利用及乳腺感染的合理防控,提高養(yǎng)殖效益。
[Abstract]:The results showed that the expression of TGF - 尾1 and IFN - 緯 in cow ' s peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) was significantly higher than those in the developed countries . CD4 T cells and 緯未T cells are involved in the synthesis and secretion of TGF - 尾1 . The long - term high - level TGF - 尾1 in the blood can promote the occurrence of fibrogenesis in the mammary gland of the cow and promote the changes of the structure of the mammary gland tissue of the mice . This study lays a foundation for the study of the pathogenesis of mastitis , and also contributes to the scientific utilization of the straw and the reasonable prevention and control of mammary infection , so as to improve the breeding benefit .
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.23

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