【摘要】：腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)是天然免疫信號(hào)通路中重要的接頭分子,筆者旨在探索豬TRAF6的抗病毒和免疫調(diào)控功能。首先利用RT-PCR從豬外周血單核細(xì)胞克隆該基因,并進(jìn)行序列比對(duì)分析;其次利用Piggybac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)建立豬TRAF6穩(wěn)定表達(dá)的PK-15細(xì)胞系;最后在細(xì)胞水平檢測(cè)豬TRAF6對(duì)偽狂犬病病毒復(fù)制的影響以及對(duì)豬IFN-β等啟動(dòng)子活性的影響。結(jié)果顯示,豬TRAF6基因?yàn)? 623bp;將豬TRAF6基因連接到Piggybac轉(zhuǎn)座子質(zhì)粒成功構(gòu)建真核表達(dá)載體PB-TRAF6,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞,經(jīng)藥物處理和熒光篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)TRAF6的細(xì)胞系;通過熒光定量PCR和Western blot確定穩(wěn)定細(xì)胞系TRAF6的高效表達(dá);體外抗病毒試驗(yàn)表明,TRAF6穩(wěn)定細(xì)胞系能夠顯著抑制偽狂犬病病毒的復(fù)制;雙熒光報(bào)告基因法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),TRAF6可以促進(jìn)poly(I:C)誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素應(yīng)答。結(jié)果提示豬TRAF6具有顯著的抗病毒和免疫調(diào)節(jié)功能,為研究TRAF6的免疫學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 (TRAF6) is an important junction molecule in innate immune signaling pathway. The purpose of this study is to explore the antiviral and immunomodulatory functions of porcine TRAF6. Firstly, the gene was cloned from porcine peripheral blood monocytes by RT-PCR and sequenced, then the PK-15 cell line with stable expression of porcine TRAF6 was established by Piggybac transposition subsystem. Finally, the effects of porcine TRAF6 on pseudorabies virus replication and IFN- 尾 promoter activity were detected at cell level. The results showed that the porcine TRAF6 gene was linked to Piggybac transposon plasmid to construct the eukaryotic expression vector PB-TRAF6, and the recombinant plasmid was transfected into PK-15 cells. The cell lines expressing TRAF6 stably were obtained by drug treatment and fluorescence screening. The high expression of the stable cell line TRAF6 was confirmed by fluorescence quantitative PCR and Western blot, and the antiviral test in vitro showed that the stable cell line could significantly inhibit the replication of pseudorabies virus. Double fluorescence reporter gene assay showed that TRAF6 could promote the type I interferon response induced by poly (I: C). The results suggested that porcine TRAF6 had significant antiviral and immunomodulatory functions, which laid a foundation for studying the immunological function of TRAF6.
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院;華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;河南省動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31602033) 河南省高�？萍紕�(chuàng)新團(tuán)隊(duì)支持計(jì)劃(14IRTSTHN015)
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：2133581