【摘要】：為比較豬卵母細胞在GV期與MⅡ期的冷凍保存效果,試驗在這兩個成熟階段對其進行玻璃化冷凍,GV期卵母細胞解凍后培養(yǎng)至成熟,MⅡ期卵母細胞解凍后恢復(fù)2h,然后采用免疫熒光標記、Western blotting和鏈霉蛋白酶溶解方法分別檢測它們的皮質(zhì)顆粒分布、CD9蛋白表達水平和透明帶消化時間上的差異。結(jié)果表明,GV期卵母細胞在解凍后2h的存活率顯著低于MⅡ期卵母細胞(P0.05),但極體排出率與對照卵母細胞無明顯差異(P0.05);在冷凍MⅡ期卵母細胞中,皮質(zhì)顆粒的皮質(zhì)區(qū)分布比例和CD9的蛋白表達水平顯著下降(P0.05),但冷凍GV期卵母細胞經(jīng)體外成熟后則無明顯變化(P0.05);冷凍GV期與MⅡ期卵母細胞均不會影響透明帶的消化時間(P0.05)。由此可見,豬卵母細胞在GV期的冷凍存活率雖然較MⅡ期低,但其體外成熟后極體排出率、皮質(zhì)顆粒分布和CD9蛋白表達水平均未受到冷凍的影響。
[Abstract]:In order to compare the cryopreservation effect of porcine oocytes during the period of GV and M II, the test was vitrified at these two mature stages, GV oocytes were cultured to mature after thawing, and 2H was restored after thawing of M II oocytes. Then, immunofluorescence markers, Western blotting and streptomycin dissolution methods were used to detect them respectively. The distribution of cortical granules, the expression level of CD9 protein and the difference in the digestion time of the zona pellucida showed that the survival rate of 2h in GV oocytes was significantly lower than that of M II oocytes (P0.05) after thawing, but the rate of polar body discharge was not significantly different from that of the control oocytes (P0.05). The cortical distribution ratio of the cortical granules in the frozen M II oocytes was compared with that of the control oocytes. The expression level of protein and CD9 decreased significantly (P0.05), but there was no significant change in the frozen GV oocyte after maturation in vitro (P0.05). The frozen GV stage and M II oocyte did not affect the digestion time of the zona pellucida (P0.05). Thus, the survival rate of porcine oocytes in GV phase was lower than that of M stage II, but it was mature in vitro. Body excretion rate, cortical granule distribution and CD9 protein expression were not affected by freezing.
【作者單位】： 云南省畜牧獸醫(yī)科學院云南省畜禽遺傳資源保護和種質(zhì)創(chuàng)新工程實驗室;
【基金】：國家自然科學基金(31402081) 云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃項目(2014FB162) 云南省高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展專項項目(201404)
【分類號】：S828

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本文編號：2119010