本文選題：豬流行性腹瀉病毒 + 單克隆抗體��； 參考：《福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)》2017年08期

【摘要】：為制備豬流行性腹瀉病毒(PDEV)的單克隆抗體,并鑒定單克隆抗體特性。本試驗(yàn)采用差速和蔗糖梯度離心純化PEDV抗原,免疫Balb/c小鼠,將免疫鼠的脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞進(jìn)行融合,經(jīng)ELISA方法篩選和細(xì)胞克隆,得到能分泌鼠抗PEDV單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株,制備出相應(yīng)的單克隆抗體,并分析其特性。試驗(yàn)結(jié)果:獲得2株能穩(wěn)定分泌抗PEDV的單克隆抗體,命名為E1和H6株,其中E1單隆抗體為IgG2a亞型,H6單隆抗體為IgM亞型,2株單克隆抗體均具有IFA、ELISA和Western bloting特性。E1雜交瘤細(xì)胞株的細(xì)胞上清液和腹水的ELISA抗體效價(jià)分別26和105,H6雜交瘤細(xì)胞株的細(xì)胞上清液和腹水的ELISA抗體效價(jià)分別24和104。2株單克隆抗體與Vero細(xì)胞、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、豬瘟病毒(CSFV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)均無(wú)交叉反應(yīng)。Western bloting測(cè)定結(jié)果表明,E1株單克隆抗體能識(shí)別PEDV的M蛋白,H6單克隆抗體能識(shí)別PEDV的N蛋白。PEDV單克隆抗體的成功研制,為PEDV免疫診斷、表位識(shí)別及蛋白研究奠定了良好基礎(chǔ)。
[Abstract]:To prepare monoclonal antibody against porcine epidemic diarrhea virus (PDEV) and to identify its characteristics. In this experiment, PEDV antigen was purified by differential centrifugation and sucrose gradient centrifugation. Balb / c mice were immunized. The spleen cells of immunized mice were fused with SP2 / 0 cells. The hybridoma cell lines secreting monoclonal antibody against PEDV were obtained by Elisa screening and cell cloning. The corresponding monoclonal antibodies were prepared and their properties were analyzed. Results: two monoclonal antibodies against PEDV were obtained, named E1 and H6. The monoclonal antibodies against E1 Monoclonal antibody were IgG2a subtype H6 Monoclonal antibody. Both McAbs had IFA Elisa and Western bloting characteristics. Elisa titers of supernatant and ascites of hybridoma cell line of E1 were 26 and 105 H6 hybridoma cell lines, respectively. The titers of Elisa antibody in supernatant and ascites were 24 and 104.2 strains, respectively. Transmissible gastroenteritis virus (TGEV), classical swine fever virus (CSFV) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSv) were not cross-reacted. Western bloting analysis showed that monoclonal antibody against E1strain could recognize the M protein of PEDV and the N protein of PEDV. Successful development of monoclonal antibodies against PEDV, It has laid a good foundation for PEDV immune diagnosis, epitope recognition and protein research.
【作者單位】： 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心;
【基金】：福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2015J01112) 福建省科技創(chuàng)新平臺(tái)建設(shè)項(xiàng)目(2014N2003) 福建省科技計(jì)劃項(xiàng)目——省屬公益類科研院所基本科研專項(xiàng)(2014R1023-7)
【分類號(hào)】：S852.651

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