發(fā)布時間：2018-07-06 18:24

  本文選題：陜北白絨山羊 + 堿性氨基酸轉運載體　； 參考：《西北農林科技大學》2015年碩士論文

【摘要】：本研究旨在探討陜北白絨山羊在吸收和轉運堿性氨基酸的生理過程中,堿性氨基酸轉運載體基因4F2hc(SLC3A2)、y+LAT1(SLC7A7)、y+LAT2(SLC7A6)、rBAT(SLC3A1)和CAT-1(SLC7A1)的主要表達部位和發(fā)育性表達規(guī)律,為進一步研究反芻動物氨基酸的跨膜轉運機制,根據山羊的生理特點,科學配制飼糧提供理論支持。根據GenBank公布的綿羊4F2hc、y+LAT1、y+LAT2、rBAT和CAT-1基因cDNA序列設計引物,通過反轉錄PCR(Reverse Transcription PCR,RT-PCR)技術克隆得到上述基因cDNA全部或部分編碼區(qū)序列(Coding Sequence,CDS),并進行序列分析;通過實時熒光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,RT-QPCR)技術檢測上述基因在3只1日齡陜北白絨山羊心臟、肝臟、腎臟、大腦、背最長肌、體側皮膚、瘤胃、十二指腸、空腸、回腸和結腸共11各組織中mRNA的表達情況;屠宰健康1日齡、6月齡、8月齡、10月齡、12月齡陜北白絨山羊各3只,共15只,采集其十二指腸、空腸、回腸組織,探討4F2hc、y+LAT1、y+LAT2、rBAT和CAT-1基因隨山羊年齡增長在小腸不同腸段中的mRNA發(fā)育性表達規(guī)律。主要研究結果如下:1.成功克隆陜北白絨山羊4F2hc、y+LAT1、y+LAT2、rBAT基因cDNA全部CDS區(qū)序列及CAT1基因部分cDNA序列。4F2hc、y+LAT1、y+LAT2、rBAT和CAT-1基因系統(tǒng)進化上同綿羊、牛親緣關系最近。2.4F2hc、y+LAT1、y+LAT2、rBAT和CAT-1基因在1日齡陜北白絨山羊各組織中mRNA的表達存在組織差異性。4F2hc mRNA在皮膚表達量顯著高于其它組織(P0.05),除皮膚外,空腸表達量最高。y+LAT1 mRNA在小腸表達量顯著高于其它組織(P0.05)。y+LAT2 mRNA在大腦和回腸中表達量顯著高于其它組織(P0.05)。rBAT mRNA在腎臟表達量最高,小腸中也有較高表達。CAT-1 mRNA在大腦表達量最高,皮膚、回腸、腎臟也有相對較高的表達。3.4F2hc mRNA在陜北白絨山羊十二指腸、空腸和回腸表達量均以1日齡山羊為最高,其它月齡山羊相同腸段之間無顯著差異(P0.05)。y+LAT1 mRNA在山羊十二指腸、空腸和回腸表達量隨山羊年齡增加均呈逐漸降低的趨勢。y+LAT2 mRNA在山羊十二指腸和空腸表達量隨山羊年齡增加呈先升高后降低的趨勢;回腸表達量以1日齡山羊為最低,其它各月齡山羊之間差異不顯著(P0.05)。rBAT mRNA在十二指腸表達量以1日齡山羊為最高,其它各月齡山羊之間無顯著差異(P0.05);空腸表達量隨山羊年齡的增加均呈逐漸降低的趨勢;回腸表達量在各年齡山羊之間無顯著差異(P0.05)。CAT-1 mRNA在十二指腸和空腸表達量均以1日齡山羊為最低,回腸表達量以1日齡山羊為最高,其它各月齡山羊相同腸段之間無顯著差異(P0.05)。綜合以上試驗結果,表明堿性氨基酸轉運載體基因進化過程中在反芻動物間高度保守;各堿性氨基酸轉運載體基因mRNA的主要表達部位存在差異,其在山羊小腸受腸段和發(fā)育階段的影響,具有不同的發(fā)育性表達規(guī)律。
[Abstract]:The aim of this study was to investigate the main expression sites and developmental expression patterns of basic amino acid transport vector gene 4F2hc (SLC3A2), y LAT1 (SLC7A7), y LAT2 (SLC7A6), rBAT (SLC3A1) and CAT-1 (SLC7A1) during the physiological process of absorption and transport of basic amino acids in Northern Shaanxi white cashmere goats. In order to further study the transmembrane transport mechanism of amino acids in ruminants, theoretical support was provided according to the physiological characteristics of goats. Primers were designed according to the cDNA sequences of sheep 4F2hcCU y LAT1rBAT and CAT-1 gene published by GenBank. All or part of these cDNA sequences were cloned and sequenced by reverse transcription PCR (RT-PCR). Real-time quantitative PCR (Real-time quantitative PCR) was used to detect the above genes in the heart, liver, kidney, brain, longissimus dorsi, body skin, rumen, duodenum and jejunum of three 1-day-old Shaanxi white cashmere goats. The expression of mRNA in 11 tissues of ileum and colon was collected from duodenum, jejunum and ileum of 3 healthy white cashmere goats aged 10 months, 10 months and 12 months old, respectively, and the tissues of duodenum, jejunum and ileum were collected, and the tissues of duodenum, jejunum and ileum were collected. To investigate the developmental expression of 4F2hccnyLAT1rBAT and CAT-1 genes in different intestinal segments of the small intestine with the age of goats. The main results are as follows: 1. The complete CDS region and partial cDNA sequence of CAT1 gene were cloned successfully from 4F2hcCU y LAT1 + y LAT2rBAT gene of Northern Shaanxi White Cashmere Goat, and the phylogenetic characteristics of CAT1 gene and CAT-1 gene were the same as that of sheep. The expression of RBAT and CAT-1 genes in all tissues of Northern Shaanxi Cashmere Goat at 1 day of age was significantly higher than that in other tissues (P0.05), and the mRNA expression of 4F2hc mRNA in all tissues of Northern Shaanxi Cashmere Goat was significantly higher than that in other tissues (P 0.05), and the expression of CAT-1 gene in all tissues of Northern Shaanxi Cashmere Goat was significantly higher than that in other tissues (P0.05). The highest expression of YLAT1 mRNA in the jejunum was significantly higher in the small intestine than in other tissues (P0.05). The expression of yLAT2 mRNA in the brain and ileum was significantly higher than that in the other tissues (P0.05) .rBAT mRNA was the highest in the kidney, and the high expression of .CAT-1 mRNA in the small intestine was also the highest in the brain. The expression of 3.4F2hc mRNA in the duodenum, jejunum and ileum of the northern Shaanxi white cashmere goat was the highest in the 1-day-old goat, and there was a relatively high expression of 3.4F2hc mRNA in the skin, ileum and kidney. There was no significant difference between the same intestinal segments of other month old goats (P0.05). Y LAT1 mRNA was found in the duodenum of goats. The expression of yLAT2 mRNA in the duodenum and jejunum of goats increased at first and then decreased with the increase of goat age, and the expression level of ileum was the lowest in 1 day old goat. There was no significant difference in the expression of rBAT mRNA among other month old goats (P0.05). The expression of rBAT mRNA in the duodenum of 1-day-old goats was the highest (P0.05), but there was no significant difference among other month-old goats (P0.05), and the jejunum expression decreased gradually with the increase of goat age. The expression of CAT-1 mRNA in duodenum and jejunum was the lowest in 1-day-old goat, and the highest in 1-day-old goat (P0.05). The results showed that the basic amino acid transporter gene was highly conserved among ruminants during the evolution, and the main expression sites of the basic amino acid transporter gene mRNA were different among ruminants. It has different developmental expression patterns in goat small intestine affected by intestinal segment and developmental stage.
【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S827

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本文編號：2103708